海藻酸微囊法冷冻保存绵羊精原干细胞.pdfVIP

网络出版时间：2013-10-22 11:12 网络出版地址：/kcms/detail/31.2035.Q1112.004.html 中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2013, 35(11): DOI: 10.11844/cj cb.2013.11.0191 海藻酸微囊法冷冻保存绵羊精原干细胞 刘代艳 罗奋华 孔群芳 包佳婧 吴应积* ( 内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室, 呼和浩特010070) 摘要 细胞冷冻保存技术是动物研究的重要组成部分。该研究首次应用海藻酸微囊冷冻 保存绵羊精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs), 旨在提高绵羊SSCs的冷冻保存效率。冻 存前后对绵羊SSCs存活率进行评估, 在绵羊SSCs液氮冻存10 d后进行细胞培养和CDH 1、PLZF 、 GFRα1、OCT-4 、Thy-1五个精原干细胞特异分子标记蛋白的免疫荧光鉴定。结果表明, 在液氮冻 存1 d后, 绵羊SSCs存活率从58.4%± 1.4%(单细胞悬液冻存组)提高到78.7%± 1.3%(海藻酸微囊包埋 冻存组); 液氮冻存10 d后, 单细胞悬液冻存组细胞存活率降低至48.1%±0.8%, 而海藻酸微囊包埋组 细胞存活率仍保持在78.0%± 1.5%。对液氮冻存10 d后的细胞进行体外培养, 培养4 d后, 海藻酸微 囊包埋冻存组能形成典型的精原干细胞簇。进行细胞免疫荧光鉴定, 发现在微囊包埋冻存10 d后 CDH 1、PLZF 、GFRα1、OCT-4 、Thy-1均显示阳性。海藻酸微囊的应用显著提高了绵羊SSCs的 冷冻保存效率, 且对绵羊SSCs的标记基因表达无显著影响。该方法的建立为其他家畜及濒危动物 种质资源保存提供了依据。 关键词 海藻酸微囊; 绵羊精原干细胞; 冷冻保存; 活率 The Applications of Alginate Microcapsules in Sheep Spermatogonial Stem Cells Cryopreservation Liu Daiyan, Luo Fenhua, Kong Qunfang, Bao Jiajing, Wu Yingji* (The Key Laboratory for Mammalian Reproductive Biology and Biotechnology, Inner Mongolia University, Hohhot 010070, China) Abstract Cryopreservation of animal cells is an essential part of cell biology. In order to improve efficacy of sheep spermatogonial stem cells (SSCs) cryopreservation, alginate microcapsules were used to cryopreserve the sheep SSCs in the present study. Cell viability and culture were evaluated and compared; The products of five SSC- specific proteins, including CDH1, PLZF, GFRα1, O