植物组织培养实验步骤的简化及其在探究性学习中的应用.pdfVIP

2010年 第 45卷 第 9期 生 物 学 通 报 51 植物组织培养实验步骤的简化及其在探究性学习中的应用 李天一 杨 帆 (1中国人 民大学附属 中学 北京 100080 2教育部考试 中心 北京 100084) 摘要 用盆栽普通烟草幼苗为材料 ，以简化 的植物组织培养实验步骤为基础 ，设计不同的 培养条件 ，探究了温度和光照对试管苗生长的影响，发现光温适宜的培养室 中培养 的再生植株 高度较低 ，叶片绿 色；而高温弱光下培养的再生植株较高，叶片黄绿色。试管苗的这些生长差异 明显与温度的高低和光照的强弱有关 本文介绍 的实验方法也可以用于探究pH、植物激素、培 养基的类型等对试管苗生长的影响。 关键词 烟草 组织培养 实验步骤 探究性学习 中国图书分类号 ：G633．91 文献标识码 ：B 植物组织培养在高中生物学课程 中是一个重 和 0．65％琼脂 ，pH5．6～5．8。按照高 中教材介绍 的 要的内容 ，笔者利用暑假 ，以简化 的植物组织培养 方法配制培养基母液、培养基及其高温灭菌。所用 实验步骤为基础 ，设计不同的培养条件 ，探究了温 的用具为高压蒸气灭菌锅、超净工作台、酒精灯和 度和光照对试管苗生长的影响，期望为利用植物 接种工具等等 。具体操作如下 ： 组织培养进行探究性学习的学生提供一些切实可 取烟草幼叶，自来水冲洗后晾干。在超净工作 行的参考。 台上 ，用镊子将叶片放入无菌烧杯 中 ，先用 70％ 1 实验原理 乙醇浸泡 30s，再用 1O％次氯酸钠溶液表面消毒 植物的根茎叶细胞一般都具有全能性．在一 6rain，然后用无菌水清洗 3次。把消毒后的叶片 定的营养和激素条件下，可以脱分化形成愈伤组 放在无菌培养皿 中，剪成 0．5cm 大小 ，接种到脱 织。将愈伤组织培养在含有不 同激素成分 的培养 分化和再分化 MS培养基上 ，每个三角瓶中放置 4 基上 ，就可 以诱导其再分化生成胚状体或丛芽 (不 个 叶外植体 。将接种后 的三角瓶分成 2组 ，一组放 定芽)，进而培养形成完整的小植株 。 在实验室 中[温度 (25~1)℃，光照 16h，光照强度 2 实验材料 、用具和方法 4000lx1，为光温适宜的培养条件 ；另一组放在夏季 实验材料为普通烟草 (Nieotianatabacum)品 自然环境的室 内(温度 30cc左右 ，光照约 1000lx)， 种 K326盆栽幼苗。脱分化和再分化培养基为 MS 为高温弱光 的培养条件 。定期观察记录实验结果 。 基本培养基 ，添加 0．2mg／L6一苄氨基嘌呤f6一BA)、 当再生 的试管苗生长到 3cm左右高时，从茎基部 0．02mg／L一萘 乙酸 (NAA)、3％蔗糖和 0．65％琼脂 ， 切离试管苗 ，将其转移到生根培养基 中诱导生根 ， pH 5．6～5．8；生根培养基为 1／2MS基本培养基 (大 培养条件 同上 。 量元素浓度减半)。添加 0．01mg／LNAA、1％蔗糖 3 实验 结果 和分 析 置玻璃片的办法 。仅是普通细胞培养板的简单加 在通风 良好 的环境 中操作 。 工 ，不需要付费：24孔细胞培养板所用 的试剂要 主要参考文献 少于商品化的培养皿 ，每个细胞制片均可 以数字 1 陈功星．贴壁培养细胞简便染色方法．生物学通报 ，2007，42 标记 (图 1)，可 以根据折光性 、数字 的正反 区别细 (12)：45． 胞附着面 ，这些对于着重于教学