1, 6-二磷酸果糖的国内研制概况.docVIP

1,6-二磷酸果糖的国内研制概况 范贵增1，王青牡2 （1江西省科学院微生物研究所，江西南昌330029；2江西省儿童医院药剂科江西南昌330006） 摘 要： 综述了国内使用游离酵母细胞法和固定化酵母细胞法生产1,6-二磷酸果糖的概况。 关键词：1, 6-二磷酸果糖；磷酸化反应；游离酵母细胞；固定化酵母细胞 本世纪初，Harden和Y oung[1]在研究糖代谢机理时就完成了1,6-二磷酸果糖（ fructose-1, 6-diphosphate, FDP）的分离和鉴定。1942年，美国Neuberg[2]等利用新鲜酵母细胞使葡萄糖磷酸化制备了FDP。近几年的多项研究表明，FDP对人体代谢调节具有多种功能，因此在医药、食品、保健品和化妆品等行业的应用日益广泛，特别是在医学上的应用，引起了国内外学者的高度重视，一时成为研究的热点之一。 1细胞膜通透性改变 FDP制备的方法有游离细胞和固定化细胞法，两法都必须改变细胞膜的通透性才能使FDP透过细胞膜并积累于反应介质中。甲苯、氯仿、乙醚。Tri-tion X-100等有机溶剂可以改变细胞膜的通透性，其中应用最多的为甲苯，用量为反应总体积的3%~6 %[3]。由于甲苯的挥发性较大，在发酵及后处理工段均会引起工场的环境污染。于明安[4]等在国内首次报道用 0.2%溴化十六烷基铰（CTAB）改变酵母细胞膜的通透性，解决了污染问题，取得了良好的效果。目前我国已有多个厂家采用这一技术。 2游离酵母细胞生产FDP Neuberg[2]和Leisola[5]等采用游离酵母细胞法，以糖、磷酸盐为底物，经酶促磷酸化反应，成功地制备FDP。此法经多次改进后，一直沿用至今，是国内外工业生产FDP的常用方法。华南理工大学王克勤[6]等应用游离酵母细胞法，采用啤酒厂废弃酵母进行中试生产，其投料糖粗品转化率15%、纯品回收率75%、纯品产率11.5%。生产的FDP纯度大于96%，外观洁白，经游离磷酸、己糖单磷酸、钙离子等杂质检测，质量优于意大利进口产品标准。于明安等 1989年完成了游离酵母酶促磷酸化反应的最适条件研究，反应时间缩短至4 h, FDP浓度提高到75g/L,1993年进行药厂中试，获得了满意的结果。笔者7于1995年起开始研究FDP的制备，在工作中体会到，游离细胞产FDP的浓度，除取决于有机溶剂改变细胞膜的通透性外，酵母细胞的培养时间和贮存条件均有较大的影响。将酵母洗净且贮存于400C可最大限度保存细胞产FDP的酶系活力。如此保存的酵母细胞经酶促磷酸化反应4h，可使FDP浓度达72 g/L。 3固定化酵母细胞生产FDP FDP是己糖代谢的一种胞内中间产物，改变细胞膜的通透性，由糖酵解循环中释放出来的FDP才可自由地透过细胞膜并积累于反应介质中。但是，细胞透性改变的同时也带来了酶的流失现象，改变透性的细胞很难保持最旺盛的磷酸化能力，不能重复使用。 要重复使用酵母细胞并连续化生产FDP，就必须采用固定化酵母细胞的方法。Bisso[8]等成功地使用交联剂戊二醛交联改变透性的酵母细胞防止酶的泄漏，制成固定化的多酶体系，在中空纤维反应器中，连续化生产FPP，产率为240 m g/h；杜振宁[9]等用卡拉胶包埋酵母细胞，外加代谢调节因子，在连续反应器内，每克湿菌体每天可产FDP450 mg，连续使用200 h, FDP产率基本不变。孙志浩 等用卡拉胶、明胶、几丁质、二酷酸纤维包埋及戊二醛交联的方法制备固定化酵母细胞，研究出固定化酵母细胞的磷酸化条件为：温度370C。pH 6.5,糖浓度1.0mo1/L ,磷浓度0.8~1.0 mo1/L。卡拉胶法、聚乙烯亚胺法和二醋酸纤维法的转化液中1,6-二磷酸果糖酸（FDPH4）的含量最高分别为50.0、59.5和60.5 g/L。王[11，12]等用戊二醛交联酵母细胞，再包埋于聚乙烯醇中，制成含糖酵解部分酶系的固定化多酶体系，选用氯丙嗪作为醛缩酶的抑制剂，再偶联上ATP再生系统，连续生产FDP，产量可维持在18.5 g/L, 1996年成功地完成了中试研究，固定化酶表现活力大于550 m gFDP/（ d?g湿细胞），底物转化率大于15%。 利用酵母细胞生产FDP是目前制药工业中较新技术。1992年国产FDP问市，但进口产品仍占据了部分市场。1998- 1999年间FDP已较大幅度降价，且进口量明显减少。 FDP是生化药物，属高附加值产品。由于FDP具有多种特殊功能，其开发与应用的潜力巨大。 参考文献： [1] Harden A, Young W.Proc Roy Soc, 1908, 80: 209 [2] Neuberg C, Lustig H. J Am Chem Soc, 1942, 64: 2722 [3] 中国专利93