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生物学教学2013年 第38卷 第2期 ? 69? 生物科学中的克隆与克隆技术 史伟平 江苏省丹阳市吕城高级中学 212351 吴 琳 赵庆新 江苏省盐城师范学院 224002 摘 要 本文从基因克隆、 细胞克隆、组织器官的分化与克隆及动物个体克隆等四个方面对克隆与克隆技术进行了归纳。 关键词 克隆 基因克隆 细胞克隆 细胞培养 组织器官分化 动物个体克隆 1 基因克隆 出人类所需的某些药物,如干扰素、 胰岛素、 白细胞介 1. 1 DNA 、 。 , 基 因克隆 定 义 基因克隆是指运用 重组技 素 抗病毒疫苗等 基因克隆技术的兴起 也为人类遗 , 。 术获得大量相同基因的过程 其基本过程包含目的基 传病的基因治疗迎来了曙光 , DNA, 1982 Palmit er 因扩增 目的基因插入克隆载体 构成含目的基 年美国的 等科学家将人和牛的生长 因与克隆载体的新的环状 DNA 新的质粒 DNA,然后 素基因在小鼠体内复制表达第一次得到了体型远远大 用转化等方法将其导入宿主细胞,接着目的基因将随 于普通小鼠的“ 超级小鼠。” 1998年我国开始推广种 着宿主细胞的扩增而复制,从而得到大量的目的基因, 植转基因抗虫棉,目前转基因抗虫棉种植已经实现产 。 。 2005 , 基因克隆是许多生物研究的基础 业化 年 哈兽医所的科学家们研制出了世界上 1. 2 H5N1 基 因克隆 的 操 作 过 程 基因克隆的一般过程是 第一个抗 禽流感病毒的基因工程灭活疫苗和 , PCR 、 H5 首先 运用 技术 鸟枪法或者人工化学合成法获 亚型禽流感重组禽痘病毒载体疫苗并投入批量生 [2] 取目的基因。 然后用同一种限制酶将目的基因和载体 产 。 1990年美国的科学家对患有严重复合型免疫 DNA 一般是质粒 分别切割,使其分别出现一个相同 缺陷症的4岁女童成功实施了基因治疗,并取得了明 的黏性末端 目的基因与载体 DNA 碱基互补配对结 显效果。 , DNA DNA 2 合 产生一个重组 分子 将获得的 分子导入 细胞克隆 , 2. 1 受体细胞中扩增 通过检测受体细胞是否获得重组 细胞 克隆 的定 义 细胞克隆是由同一个起始细 DNADNA , 分子的某些特性 如抗性 确定重组 是否成 胞分裂繁殖而形成的细胞群 该细胞群中每个细胞含 , 功导入受体细胞 最后目的基因将随着受体细胞的复 有的遗传信息与起始细胞的遗传信息相同 获得细胞 制而得到扩增。 克隆的关键技术是细胞培养技术。 PCR技术扩增目的DNA的一般过程是 在95℃ 高 2. 2 动 物细胞 克隆 技 术 组织块培养法和悬浮细胞 温下,模板双链 DNA 分子变性分开为 2条单链 DNA 培养法是获得动物克隆细胞的最常用方法。 组织块培 , 55℃ ~ 60℃ ,2 分子 然后 在退火温度 下 条新产生 养法的操作步骤一般为 在无菌条件下取出目的细胞 3 DNA , , 1 ~ 2mm , 的单链 分子可分别作为模板合成互补链 在一对 所在的组织 切成 的小组织块 用移液管将 寡核苷酸引物与模板 DNA链两端退火位点结合下,加 小组织块移至培养瓶中。 接着,在培养瓶中加入灭菌 热至72℃ 左右,热稳定 DNA聚合酶 T aq 酶 从引物开 的培养液,将培养瓶置于37℃ 的条件下培养。 悬浮细 始合成新链。 接着,反应物又一次高温变性,使新合成 胞培养法是先用胰蛋白酶等解离液将小组织块离散成 的 DNA分子2条链分开,然后再进行引物退火,新的 , , 单个细胞 用离心机低速离心洗涤细胞 然后将细胞转 DNA , 。 , DNA 分子合成 如此循环反应 理论上 目的 分 移至培养瓶中配置成一定浓度的细胞悬浮液放入培养 [1] 。 。 子的数量成指数增长 箱中培养 DNA 2. 3 鸟枪法的一般操作过程是 用限制酶将供体 植 物细胞的 悬浮 培养技 术 植物细胞具有全能 切成许多片段再送入不同的受体细胞中扩增,从中选 性。 单个植物细胞在适当条件下进行体外培养时,可 取含目的基因的细胞并将其中的 DNA片段分离出来, 以脱分化为愈伤组织。 如果继续提供足够的营养物质 获得目的基因。 和化学刺激,愈伤组织将分化形成根、 芽等器官,直到 。 人工化学合成法的一般操作过程是 已知目的基 长成一株新的植株 , 因的核苷酸序列或根据目的基因表达产物的氨基酸序 植物悬浮培养的最初材料是愈伤组织 使其在培 。 。 列推出相应核苷酸序列然后用化学法合成目的基因 养液中分散成单个细胞或小的细胞团块 首先应配置 1. 3 基 因克隆 的成 果 与 意 义 基因克隆技术通常与 细胞悬浮培养基,培养基内应当加入植物细胞分裂和 基因重组技术相结合,在农业和畜牧业上用于动植物 生长所需的营养成分,包括各