副结核分枝杆菌map0862基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

· 1O· 中国兽药杂志 2010，44(8)：10～12，21／牟 巍，等 副结核分枝杆菌map0862基因的克隆 及其在大肠杆菌中的表达 牟 巍 ，蒋 菲。，何 宇 ，丁家波 ，彭小兵 ，蒋玉文 (1．中国兽医药品监察所，北京 100081；2．福州大北农动物医学研究中心，北京 100097；3．中国农业大学动物医学院，北京 100193) [收稿 日期]2010—06—03 【文献标识码]A [文章编号]1002—1280(2010)08—0010—04 [中图分类号】$852．61 [摘 要] 为探索MAP0862蛋 白在分枝杆菌感染鉴别诊断中的作用，研究构建 了MAP0862的 原核表达map0862一pET32a(+)质粒，并对其进行了诱导表达。以副结核分枝杆菌PIO基因组 DNA为模板，经PCR方法扩增副结核分枝杆菌 map0862基 因片段，将其克隆到原核表达载体 pET32a(+)中。将重组子转化到大肠杆菌BL21(DE3)，在 coli中诱导表达带组氨酸标签的 map0862一pET32a(+)的融合蛋 白。结果显示，经 IPTG诱导表达出约55kD的融合蛋 白，用副结 核 阳性血清进行 Westernblot检测 ，证明MAP0862重组蛋 白具有 良好 的免疫原性。 [关键词 】 副结核分枝杆菌；map0862基因；克隆；表达 CloningandExpressionofMycobacterium avium subsp． ParatuberculosisGenemap0862inE．coli MUWei ，JIANGFei。，HEYu DINGJia—bo。，PENG Xiao—bing ，JIANGYu—wen ， (1．ChinaInstituteofVeterinaryDrugControl，Beijing100081；2．VeterinaryMedicineResearchCenterofFuzhouDaBeiNong。Beijing100097； 3．CollegeofVeterinaryMedciine，ChinaAgriculturalUniversity，Bering100193；China) Abstract：InordertodeterminethefunctionoftheMAP0862inthepreventionanddiagnosisofJohne’Sdisease incattle，thevectormap0862一pET32a(+)wasconstructed．Thegenemap0862wasamplifiedfrom avium subsp．paratuberculosisstrainPIObyusingPCRtechnique．PCRproductwasclonedintopET32a(+)plasmid， thentherecombinantplasmidwastransfomredintoE．coliBL21(DE3)andexpressed．Resultsshowedthatthe recombinantprotein about55 kD wasexpressed and could be recognized by serum ofM．avium subsp． paratuberculosisinfected cattle in western blot．Thewestern blotanalysisshowed the expressed proteinhad antigenicactivity． Keywords：Mycobacterium avium subsp．Paratuberculosis；map0862gene；cloning；expression 副结核病是 由禽结核分枝杆菌副结核亚种杆 计克隆氏病每年造成美国2．5亿美元的损失 。 菌引起的一种慢性传染病，Johne和 Hothinghow于 我国从 1955年在内蒙