银鲫HIRA多克隆抗体制备及组织特异性表达分析.pdfVIP

第 32 卷 第 3 期 水 生 生 物 学 报 Vol . 3 2 ,No . 3 2 0 0 8 年 5 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA May , 2 0 0 　8 银鲫 HIRA 多克隆抗体的制备及组织特异性表达分析 1 1 2 周 　励 　王玉凤 　桂建芳 ( 1. 华中师范大学生命科学学院 ,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室 ,武汉 　430079 ; 2 中国科学院水生生物研究所 ,淡水生态与生物技术国家重点实验室 ,武汉 　430072) 摘要 : Hir/ Hira 基因家族的成员广泛存在于多种生物体中,但有关其在生物体发育过程中的具体功能还不甚清楚 。 对果蝇的研究表明, dHira 基因产物可能在受精时精核的解凝过程和雄性原核的正常形成过程中起重要作用 。本研 ( ) 究组前期已经分别克隆出雌核发育银鲫和两性生殖彩鲫的 Hira 基因 cagHira 和 caHira ,本实验在银鲫 cagHira 基因 的特异区域 ,设计一对引物 ,以银鲫成熟卵母细胞总 RNA 逆转录出的 cDNA 为模板 ,扩增出 cagHira 的特异片段 。再 ( ) 将该片段克隆到原核表达载体p ET32a 上 ,转化BL21 DE3 菌株 ,经诱导后表达出融合蛋白。分析表明,该融合蛋白主 要以包涵体形式表达 。以纯化的融合蛋白作为抗原去免疫小鼠,制备多克隆抗血清 ,经蛋白质印迹分析检测 ,该抗血 ( ) 清 稀释到 1 ∶2000 与包涵体蛋白识别反应良好 ,确定获得了具有高效价的特异性银鲫 CAGHIRA 多克隆抗体 ,为进一 步研究 HIRA 在鱼类发育和雌核生殖过程中的作用奠定了基础 。对银鲫 HIRA 蛋白的组织特异性表达分析发现 ,该蛋 白仅在成熟卵巢组织中特异表达 ,故表明 HIRA 可能对鱼类卵子发生和/ 或早期胚胎发育具有重要作用 。 关键词 : 银鲫 ;HIRA ;抗体制备 ;组织表达 + ( ) 中图分类号 :Q344 13 　　文献标识码 :A 　　文章编号 2008 　　以特殊的雌核发育生殖方式繁衍后代的银鲫 相互作用 ,对组蛋白基因的转录和异染色质的沉默 ( Carassius auratus gibellio) , 由于其卵母细胞发育、成 起调节作用 。最近的研究表明 , HIRA 蛋 白的 N 端 熟和受精有别于普通两性物种 ,且具有在异源精子 可通过调节细胞周期及细胞凋亡相关基因的表达对 受精时精核不解凝 , 同源精子受精时精核部分解凝 细胞的生长起重要的调控作用[ 12 ] 。C 端负责 HIRA 等特性 , 已成为独特的研究系统 ,为揭示卵母细胞的 ( ) 与成对的同源异型域 Paired homeodomain 、Hir 互作 发育、成熟 、受精以及动物性别决定等发育生物学中