五种辛夷的同工酶图谱鉴别研究.pdfVIP

2010年 11月 第 12卷 第 11期 中国现代中药ModemChineseMedicine Nov．2010 Vo1．12 No．11 五种辛夷的同工酶图谱鉴别研究 宋健 ，张会敏 ，于宗渊 ，石俊英 (1．山东中医药大学，山东 济南 250355；2．山东省中医药研究院，山东 济南 250014) [摘要] 目的：建立辛夷中药材的同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)生物图谱。方法：采用过氧化物酶同 工酶(POD—PAGE)、酯酶同工酶(EST—PAGE)对来 自不同产地的5种辛夷的10个样品进行PAGE图谱分析。结果： 10个样品的POD．PAGE与EST—PAGE图谱在谱带分布及数量上均具有显著性差异，分别具有各 自的鉴别谱带特征。 结论：PAGE图谱鉴别方法快速、灵敏、操作简便，可作为鉴别不同品种、产地辛夷药材的可靠方法。 [关键词] 辛夷；同工酶；PAGE；指纹图谱 辛夷 为木 兰科 植 物望 春 花 Magnoliabiondii 1．3材料 Pamp．、玉兰 MagnoliadenudataDesr．或武 当玉兰 实验样品的产地、来源、采收时间等参见表 1， MagnoliasprengeriPamp．的干燥花蕾…，具有散风 所有实验样品经山东中医药大学药学院石俊英教授 寒，通鼻窍的功能。用于风寒头痛，鼻塞流涕，鼻 鉴定均为正品。 鼽，鼻渊。辛夷以花蕾人药，花开和凋谢者不作药 表 1 辛夷样品来源 用，因此符合标准和质优的辛夷上市量有限。为了 优化辛夷药材的品种，我们进行了不同产地 5种辛 编号样品 拉丁学名 产地 留／ 夷的过氧化物酶 (POD．PAGE)和酯酶 同工酶 (EST PAGE)的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，建立 了不同产 地、不同品种辛夷中药材的同工酶 PAGE生物鉴别 方法，旨在为辛夷的种质资源鉴定和开发提供科学 依据。 1 仪器、试剂及材料 1．1仪器 DYY．稳流稳压 电泳仪 (北京六一仪器厂)、 DYY—m28型电泳仪槽 (北京六一仪器厂)、EDAS- 290凝胶成像紫外分析仪 (北京市新技术应用研究 所)、LGR16．W 高速冷冻离心机 (北京医用离心机 2 方法与结果 厂)、FA1104型电子天平 (上海天平仪器厂)、旋片 2．1POD—PAGE图谱分析 真空泵(1400r·min。) (浙江黄岩求精真空泵厂)、 2．1．1样品制备 将采集到的新鲜样品立即放置到 超声提取器 。 装有冰块的冷冻保温瓶中，密封，备用。取纯净的 1．2试剂 冷冻新鲜样品约 1g，加入稀释4倍的浓缩胶缓冲液 分离胶缓冲液 (pH8．9)；分离胶贮液；过硫酸 (或电极缓冲液、稀醇液等)0．5～1mL，研磨成匀 铵溶液；浓缩胶缓冲液 (pH6．7)；浓缩胶贮液； 浆，3500r·rain离心 15min，取上清液加等体积的 40％蔗糖溶液；电极缓冲液(pH8．3)；四甲基 乙二 40％蔗糖溶液，4cc保存，供点样用。 胺(TEMED)；0．1％溴酚蓝指示剂；考马斯亮蓝染 2．1．2凝胶的制备 参见表2。 色液；醋酸联苯胺显色液；坚牢蓝染色液；脱色液； 2．1．3电泳操作 用微量进样器吸取样品提取液 40 琼脂液。 ， 缓缓注入样品槽底部，在负极槽 电极缓冲液中 [通讯作者] 石俊英，Tel：(0531E—mail：sjy5012@126．com · 26 · 2010年 11月 第 12卷 第 11期 中国现代中药 ModernChineseMedicine Nov．2010 Vo1．12 No．1l 表2 POD．PAGE电泳凝胶的配制 OD 3％浓缩胶液 (4mL) 7％分离胶液(16mL) 浓缩胶缓冲液(pH6．7) 0