麻疯树FAD3基因的克隆及亚细胞定位研究.pdfVIP

热带作物学报 2012，33(11)：2030—2034 ChineseJournalofTropicalCrops 麻疯树 ．3基『因的克隆及亚细胞定位研究 付瑜华 ，陈 新 ，王文泉 1海南大学农学院，海南海口 570228 2中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海南海 口 571101 摘 要 为研究麻疯树JcFAD3的亚细胞定位 ．本实验从麻疯树叶片中克隆了JcFAD3基因，将其与绿色荧光蛋 白基因融合构建植物表达载体 利用基因枪转化的方法将重组载体转人到洋葱表皮细胞中进行瞬时表达，通过 检测融合蛋 白在洋葱 内表皮细胞 中的分布来对 JcFAD3基 因进行亚细胞定位 ，荧光显微镜检测结果表 明， D3基因表达产物定位于细胞质 中。 ， 关键词 麻疯树微粒体 0‘—3脂肪酸去饱和酶；绿色荧光蛋 白；亚细胞定位 中图分类号 Q78：Q949．753．5 文献标识码 A CloningandSubcellularLocalizationofFAD3ofJatrophaCurcasL． FU Yuhua ，CHEN Xin，WANG W enquan 1CollegeofAgronomy,HainanUniversity,Haikou，hmnan570228,China 2InstituteofTropicalBioscienoeandBiotechnology,CATAS，Haikou，h~nan，571101，China Abstract Toidentifythesubcellular1ocationofJcFAD3ofJatrophaCurcasL．．JcFAD3wasclonedform Jatropha leaves and fused in—frlame to a green fluorescentprotein gene in order to construct the recombinantvector pCMBIA1304一FAD3．I1le recombinantvector pCMBIA13O4一 E(f3 wastransfomr ed into onion epidermiscellsby thegenegun methodand thetransientexpression ofJcFAD3 and GFP fusion protein in onion epidemralcells showedthatJc D3proteinwaslocalizedinthecytoplasm． Keyword Microsomako一3fattyaciddesaturase：GFP；Subcellular doi 10．3969／i．issn．1000—2561．2012．11．021 麻疯树 (JatrophacurcasL．)，属大戟科麻疯树 基 因表达产物在组织细胞 中的定位是基 因功 属 ．主要分布于全球热带和亚热带地区。种仁 中脂 能研究的一个重要 内容 ．通常借助于报告基因的 肪类物质含量高 ．除含有约 2l 的饱和脂肪酸外 ． 表达产物来对 目标蛋 白进行定位 绿色荧光蛋 白 还含有 70％以上 的不饱和脂肪酸 ．主要为油酸 (GFP)在细胞 中表达时，可以在蓝光或紫外光的 (41．6％)和亚油酸 (33．8％)及微量的亚麻酸 (1．1％)[1-2]。 激发下产生明亮 的绿色荧光 ．因此 GFP作为报告 由于麻疯树种子油流动性好 ．因此被认为是生产生 基因不仅被广泛应用在了动植物的基因表达和蛋 物柴油的良好原料 ．麻疯树也被认为有可能成为代 白质定位研究中7[-11]．还被应用于细胞 间物质运 替化石能源、具有巨大开发潜力的物种 。植物组织 输及运输 的动力学研究中l2【] 本研究从麻疯树 叶 中不饱和脂肪酸的组成和