肝癌石蜡包埋组织miRNA提取方法的优化.pdfVIP

重庆医学 2012年 12月第 41卷第34期 3623 · 技术与方法 · 肝癌石蜡包埋组织miRNA提取方法的优化 党裔武 ，容敏华。，陈 罡 (1．广西医科大学第一 附属医院病理科，南宁 530021；2．广西医科大学附属肿瘤医院 实验研 究部，南宁 530021) 摘 要 ：目的 改进并优化从肝癌(HCC)甲醛 固定石蜡包埋组织(FFPE)提取并检测微小 RNA(miRNA)的方法。方法 使 用 miRNeasyFFPE试剂盒探讨提取 HCC石蜡组织 miRNA 最佳切片厚度及 蛋 白酶 K作用 时间。实时定量 RT—PCR检测 miR- 221、miR一146a、1et7一a、miR一191、miR-103及 RNU6B的表达量。将HCC细胞制成石蜡组织，对 比同一细胞系新鲜细胞及石蜡包埋 细胞的各个miRNA表达量差异。结果 切片厚度 30z／m，蛋白酶K作用时间48h时提取miRNA效果最佳。各 HCC细胞系及 临床 HCC石蜡组织均有不同水平的miRNA-221、miR-146a、let7-a、miR-19l、miR-103及RNU6B表达。同一细胞系新鲜细胞与 石蜡包埋后的各miRNA表达无明显差别。结论 改 良后的miRNeasyFFPE提取方法能提取石蜡组织中的m NA，可重复性 强，可推广用于临床各种石蜡包埋组织的miRNA提取 。 关键词 ：微 RNAs；甲醛；石蜡包埋 ；肝肿瘤 ；逆转录聚合酶链反应 doi：l0．3969／j．issn．1671—8348．2012．34．020 文献标识码 ：A 文章编号：1671-8348(2012)34—3623-03 optimizationofM ieroRNA extractionmethodfrom HCC FFPE tissues’ DangYiwu ，RongM inhua。，ChenGang (1．DepartmentofPathology，theFirstA所 liatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity，Nanning，Guangxi530021，China； 2．DepartmentofResearch，A{铽liatedCancerHospital，GuangxiMedicalUniversity，NanningGuangxi530021，China、 Abstract：Objeetive TomodifyandoptimizethemicroRNA(miRNA)extractionanddetectionapproachfrom hepatocellular carcinoma(HCC)formalinfixedparaffinembedded(FFPE)tissues．Methods miRNeasyFFPEkitwasperformedtoinvestigatethe optimizationalthicknessofsectionsfrom HCCFFPEtissuesandtimeofproteaseK treatment．Afterwards，expressionofmiR-221， mi1 146a，let7一a。miR一191，miR一103andRNU6Bwasdetectedbyrea1timeRT-PCR．ThedifferenceofthemiRNA expressionbe— tweenfreshcellsandFFPE tissuesfrom thesamecelllinewasalsocomparedbyrea1timeRT-PCR．Results 30um thicknessand 48hofproteinaseK treatmentwerethebestparameterstoisolatemiRNA．DifferentexpressionlevelsofallthemiRNAscouldbe detectedinboththeHCC cellssamplesandclinicFFPEsamples．