蛋氨酸负荷后大鼠主动脉血管内皮细胞早期形态扫描电镜观察.pdfVIP

广东微量元素科学 GUANGDONGWEILIANGYUANSUKEXUE 第 l8卷第 5期 文章编号：1006—446X (2011)05—0021—05 蛋氨酸负荷后大鼠主动脉血管内皮细胞 早期形态扫描电镜观察 周怡伶 黄德贵 杨 波 (温州医学院，浙江 温州 325035) 摘 要：为探讨蛋氨酸负荷对大鼠主动脉血管内皮细胞早期形态的影响，将雄性Wistar大鼠随机 分为正常饮食对照组 (对照组)和蛋氨酸负荷组 (蛋氨酸组)，对照组喂饲普通饲料，蛋氨酸负荷组 大鼠喂饲含3％蛋氨酸的饲料，共8周，用扫描电镜观察了主动脉弓血管 内皮细胞形态。结果表 明，蛋氨酸负荷后大鼠主动脉弓内皮细胞呈典型虫蛀样损害，伴有附壁血栓形成和脂质沉积。提 示蛋氨酸负荷饮食可影响动脉血管内皮细胞形态的早期改变，诱发大鼠高半胱氨酸血症和内皮功 能障碍。 关键词：蛋氨酸；扫描电镜；同性半胱氨酸；主动脉内皮 中图分类号：R543．1 文献标识码：A 血管内皮细胞 (vascularendothelialcell，简称 VEC)是覆盖于心血管内腔表面的一层连续单层 扁平细胞，可以合成和释放多种心血管活性因子，从而调节并影响VEC在心血管疾病发生发展 中的作用…。前期实验研究证明，长期高蛋氨酸饮食可以影响血管内皮细胞的内分泌功能，多 种心血管活性因子分泌失衡 。本实验研究通过扫描电镜观察蛋氨酸负荷后大鼠血管内皮形态 早期改变，为高半胱氨酸血症内皮功能障碍提供客观形态学证据。 1 材料与方法 1．1 动物与分组 选用健康雄性8周龄Wistar大鼠20只，体质量 (155士5)g，由中国科学院上海实验动物中 心提供。习服饲养后，随机分为两组：正常饮食对照 (对照组)和蛋氨酸负荷组(蛋氨酸组)，每 组 10只。 1．2 8周蛋氨酸负荷实验 除对照组外，蛋氨酸负荷组大鼠喂饲 3％高蛋氨酸饲料饮食，持续8周，并分别记录各组大 鼠日平均摄食总量和体质量。高蛋氨酸饲料是在普通饲料制成颗粒以前，按3％的比例添加蛋氨 酸，再制成颗粒饲料。 一蛋氨酸为上海斐雅科技发展有限公司产品，批号 1．3 取 样 饲养8周后，各实验组禁食24h后，称质量并依次用2％戊巴比妥钠 (50mg／kg)腹腔注射 麻醉，腹主动脉取血，注入 120 含2％的EDTA—Na的无菌抗凝试管中，全部血样置于冰浴 收稿 日期：2010—09—29 作者简介：周怡伶 ，女，温州医学院第二临床医学院康复治疗学专业本科生。 通讯作者：杨波，研究方向：营养与疾病。E—mail：yb@wzmc．net · 2l · 广东微量元素科学 2011生 GUANGDONGWEILIANGYUANSUKEXUE 第 l8卷第5期 中预防溶血，常规制备血浆，一20℃以下冰箱保存、待测。迅速打开胸腔，取下主动脉弓，剥离 动脉附着组织，生理盐水清洗血迹，取主动脉弓下段 1～2cm迅速投入预置 2．5％戊二醛溶液前 固定。 1．4 测试方法 1．4．1 血管内皮细胞扫描电镜观察 各实验组大鼠于8周末腹主动脉采血后，迅速打开胸腔， 取下主动脉 弓，剥离动脉附着组织，生理盐水清洗血迹，取主动脉 弓下段 l～2cm迅速投入预置 2．5％戊二醛溶液的青霉素小瓶前固定，制作扫描电镜样品标本。分别经 PBS清洗 、锇酸后固 定、乙醇梯度脱水、C02临界点干燥和离子溅射法镀金，最后用XL30型扫描电子 微镜 (荷兰 Philips—FEI公司)观察及拍照。 1．4．2 大鼠日平均摄食总量与血浆同型半胱氨酸测定 经适应性喂养 1周后，各组大鼠每天均 给予等量颗粒饲料D (共计约200g)，待次 日清晨将大鼠剩余食物称量 (D：)，前后两次称质量 结果之差即为该组大鼠当日摄食总量 (D。一D：)。实验期间每 日记录各组大鼠日摄食总量，于实 验结束将该组大鼠