普洱茶发酵样品细菌和真菌DNA同时提取方法研究.pdfVIP

中国磨 通报 2011，27(15)：249—253 ChineseAgriculturalScienceBulletin 普洱茶发酵样品细菌和真菌DNA同时提取方法研究 孙婷婷，赵 明，李亚莉，张春花，梁 丽，袁文侠 ，周红杰 (云南农业大学普洱茶学院，昆明650201) 摘 要：为建立提取普洱茶发酵样品中微生物DNA的方法。首先比较 了3种发酵样品中茵体收集方法， 其次改进了omega小量植物DNA提取试剂盒的提取方法，以DNA的纯度、提取率和细菌16SrDNA、真 茵 微管蛋白基 因PCR扩增为指标 ，评价提取DNA质量。实验发现茶样 (5g)加Tween-NaC1缓冲液 (50mL)，静置30rain，超声波振荡10mni，离心(10min，12000r／mni)的茵体收集方法和在omega小量 植物DNA提取试剂盒中引入液氮研磨、溶茵酶和破壁酶联合裂解细胞的方法提取的DNA纯度好。可以 分别扩增出细菌16SrDNA和真菌 微管蛋白基因。建立了普洱茶发酵样品细菌和真菌DNA同时提取 方法，为开展普洱茶固态发酵过程微生物多样性的分子生物学研究奠定了基础。 关键词：非培养技术；动态变化；微生物群落；普洱茶发酵；同时提取 中图分类号：$432．4+4 文献标志码：A 论文编号：2011-0449 SimultaneousIsolationofBacterialandFungalDNAfrom Pu-erhTeaFermentationSamples SunTingting，ZhaoMing，LiYali，ZhangChunhua，LiangLi，YuanWenxia，ZhouHongjie (CollegeofPu-erhTea，YunnanAgriculturalUniversity，Kunming650201) Abstract：Theaim wastodevelopamethodtoisolatemicrobialDNAfrompu-erhfermentatedsamples．Th ree assaysforextractionofmicroorganismsfrom pu-erhfermentationsma pleswerecompared，theDNA isolation methodswereimprovedonthebasisofHPPlantDNAKit(omega)，andtheDNAquali~weremeasuredbythe quantity(0D26o)，purity(ODvJ28o)，andthepossibilityforPCRamp|ificationofbohtbacterial16SrDNAand fungifl-tubulingenes．Theresultsofultravioletspectrophotometeranalysis，PCRamplification，nadagraose gelelectrophoresisshowedthatmicrobeswereaccumulatedbysteepingfemrentedteasmaple(5 in Tween—NaC1buffer(50mE)，washingwitllasonicatorfor10min，andhtencentrifugation (10rain， 12000r／min)；DNAwasextractedemployedwithcelllysesbygrindingwithliuqidnitrogen，hydrolysiswith lysomymeandlyticase，andthenpurificationusingtheHPPlantDNAKit(ome~ ．Bothbacterial16SrDNA andfungifl-tubuhngenescouldbeamplifiedusingtheextractedDNAastemplates．Asimultaneousisolation of bacterialandfungal DNA from pu-erh teafemr entationsampleswa