促性腺激素释放激素对人卵巢癌细胞系OVCAR3体外生长调控作用的研究.pdfVIP

30 现代医院2010年 l1月第 1O卷第 l1期 专 业 技 术 篇 ModemHospitalNov2010~ol10No11 促性腺激素释放激素对人卵巢癌细胞系 OVCAR3体外 生长调控作用的研究 陈 红 巫巧雄 陈文萍 RESEARCH OF THE REGU ION EFFECT OF GONADOTROPlNE RELEASlNG HOR— MONEON OVCAR3OFHUMAN OVARIAN CANCERCELLSYSTEM GRO＼／I＼几’H lNVITRO CHENHong，WUQiaoxiong，CHENWenping 【摘 要】 目的 观察GnRH受体在人卵巢癌细胞系OVCAR3中的表达，并研究促性腺激素释放激素 激动剂(Triptorelin)对卵巢癌细胞体外生长调控作用。方法 采用免疫组化 sP法检测卵巢癌细胞系 OVCAR3GnRHI受体的表达；分别应用不同浓度Triptore]in作用于细胞 ，MTr法检测细胞生长抑制率。结果 人卵巢癌细胞系OVCAR3表达GnRHI受体，Triptorelin可明显抑制 GnRHI受体阳性的OVCAR3细胞生 长。结论 促性腺激素释放激素激动剂Triptore]in通过与人卵巢癌OVCAR3细胞株GnRHI受体结合，发挥 抗增殖 的作用。 【关键词】 促性腺激素释放激素激动剂 OVCAR3细胞株 GnRHI受体 doi：10．3969／j．issn．1671—332X．2010．11．012 人下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)在体内的生理 1．3 四甲基偶氮唑蓝 (MTr)比色法测定细胞增殖 调节功能是由受体介导的，促性腺激素释放激素与受体的结 对数生长期细胞用胰酶消化后 ，以1X10‘个／孔细胞数 合具有高度特异性。近年来研究发现，其受体除位于下丘 加入96孑L培养板，每孔接种细胞悬液 180 ，培养24h，细 脑、垂体、性腺轴外，在机体其他组织，尤其是外周性腺组织 胞贴壁后换培养液，加入含 10％FCS1460培养液，200 中也有分布，人类卵巢癌患者肿瘤组织表面有促性腺激素释 孔，按实验设计分组为：Triptorelin组：在96孔培养板中加入 放激素受体表达。为探讨GnRH类似物对人卵巢癌细胞系 不同浓度Tfiptorelin溶液20ILl，使终浓度分别为lO～、l0一、 增殖的抑制作用，进一步有效地利用促性腺激素释放激素相 1O～、1O～、1O 和 10～mol／L，每个浓度设6个复孔 ，继续 关药物治疗卵巢癌，我们设计了本实验。 培养42 h。对照组：每孔加PBS20 ，继续培养24h。各孔 1 材料与方法 分别加入2O MTT溶液，置培养箱内再孵育4h后吸尽上 清液，于各孑L中加二甲桠枫200 l，置震荡器上震荡 10min， 1．1 材料 用酶标光度计测出每孔中波长为490nnl的吸光值 (A490)。 Triptorelin购自辉凌制药有限公司，GnRHI受体单克隆 按下式计算生长抑制率In(％)：生长抑制率In(％)=(1一 抗体，免疫组织化学 (免疫组化)链霉菌素抗生物素蛋 白一 实验组平均 A490mm／对照组平均A490ram)×100％。 过氧化物酶连接(sP)法试剂盒为Santacruz公司产品。RP— 1．4 GnRHI受体检测 MI一1640完全培养基 (按说 明用三蒸水配制，临用前按 采用免疫组化方法检测OVCAR3细胞的GnRHI受体， 10％浓度加灭活的新生小牛血清)，MTr[3一(4，5一二甲基 CnRHI受体免疫反应 阳性细胞，呈棕黄色，分布于细胞质 2一噻唑)一2，5二苯基溴化四唑](购 自北方同正公司)；二 内，胞核星阴性，背底不着色。 甲基亚砜 (购 自重庆试剂公司)；末端脱氧核苷转移酶凋亡 1．5 统计学方法 原位染色试剂盒，购 自博士德生物工程有限公司。卵巢癌细