顺铂干预对A549中干细胞因子Nanog表达及侵袭力的影响.pdfVIP

广东医学 2012年3月第 33卷第 6期 GuangdongMedicalJournalMar．2012，Vo1．33，No．6 · 733 · 顺铂干预对 A549中干细胞因子 Nanog表达及 侵袭力的影响木 石磊芝 ，苏鹏 ，王天一 ，杜亚明 ，王 中彬 辽-7医学院附属第一医院 胸外科，肿瘤科(辽宁锦州 121000)；辽宁省辽阳市中心医院胸外科(111000) 摘【要】 目的 研究顺铂干预肺癌细胞系A54972h后检测Nanog在细胞中的表达及侵袭力的变化，探讨干 细胞因子 Nanog和肺癌顺铂耐药之间的相关性，试图解释临床上化疗耐药的原因。方法 肺癌细胞 系A549顺铂 干预72h后通过RT—PCR和免疫细胞化学检测干预前后细胞 中Nanog在mRNA和蛋 白的水平表达情况，通过 Transwell体外侵袭实验检测顺铂干预前后侵袭力的改变。结果 肺癌细胞 系A549顺铂干预72h后干细胞基因 NanogmRNA和Nanog蛋白表达增高，顺铂干预后穿膜细胞数 [(66±9)个]高于干预前[(404-6)个]，差异有统计 学意义(P0．05)，侵袭力增强。结论 低浓度顺铂只能杀死普通癌细胞，不能杀死癌干细胞，此可能是癌细胞生 长增殖、耐药和侵袭转移的主要原因。解释 了传统化疗只能短暂控制肺癌的发展，而不能根 治肺癌，用药不久出 现耐药、癌细胞 以更快的速度生长、侵袭转移这些现象。 【关键词】 肺癌；Nanog；顺铂；干细胞；侵袭力 原发性支气管肺癌 (简称肺癌)是 目前人类最常 TCAGGGCTGTCCTGAArIA’AGC一3 ．156bp)和 GADPH 见的恶性肿瘤之一。近20年来其病死率在全部恶性 (正向：5 一CCACCCATGGCAAATrCCCATGGCA一3； 肿瘤中上升幅度最大，位居首位…。肺癌发病率在我 反向：5 一TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC一3，597 国城市中位居常见恶性肿瘤的首位；农村位居第3位 ， bp)引物、MarkerDL2000、RT—PCR试剂盒 (Takara公 已引起广泛重视 。我国肺癌的发病率 已高达61．4／ 司)，TRIzol(Invitrogen公 司)，琼脂 糖 (西班 牙 Bio- 10万 ，预计到2015年，我国将成为肺癌高发国。对肺 west)，Transwell小室(Coming公司)。 癌的治疗主要是手术治疗为主联合放疗和化疗等综合 1．2 方 法 治疗 ，但是现有方法已经达到其治疗的极限，近年来肺 1．2．1 细胞培养 肺癌细胞被培养在 DMEM培养基 癌 5年生存率仍不乐观，其 中化疗耐药在临床十分常 中，这个培养基含有 10％胎牛血清，不含有抗生素， 见。近年来大量研究显示癌肿瘤 内一部分具有干细胞 5％CO，、37℃的细胞培养箱 中培养；当细胞生长至 特征 的癌 细胞——癌 干 细 胞 (cancerstem cells， 80％融合时进行传代。 CSCs) 是诱发及维持肿瘤不断生长 的源头。PAN 1．2．2 体外药物干预 接种96孑L板后第 2天加顺 等 利用无血清的培养基分离出肺癌干细胞 ，这些癌 铂 ，先通过 M1Tr求出加入顺铂作用72h的Ic。(6．27 干细胞比肿瘤内其他较成熟的癌细胞对传统化疗更具 g／mL)，接种6孔板 ，第2天加入顺铂至终浓度5 g／ 抗药性，导致 目前 的化疗方案难 以彻底治愈肺癌。 mL(低于 IC浓度)，72h后收取细胞做后续实验，无 Nanog基因作为全能性或多能性干细胞标记物，在胚 药物干预作为阴性对照。 胎干细胞 (embryonicstemcells，ESCs)诱导多能干细胞 1．2．3 RT—PCR 细胞总 RNA的提取按照Trizol试 和生殖细胞肿瘤中的表达研究较多，作为癌干细胞的 剂说明进行 ，取5 g总RNA，按照RT—PCR试剂盒说 重要基因，在肺癌中的研究较少。2010年5月至2011 明书进行逆转录合成cDNA，PCR扩增 目的基因时采用 年 3月，本研究 旨在顺铂干预肺癌细胞系A54972h后