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维普资讯
山东医药2008年第 48卷第 l2期
鼠抗人肥大细胞羧肽酶截短体抗体的
制备与鉴定
陈章权。陆田田，黄 震，梁晓东
(广东医学院，广东湛江524023)
[摘要] 目的 建立检测人肥大细胞羧肽酶 (hMCCP)的双抗体夹心ELISA法，以hMCCP截短体免疫小 鼠，
制备鼠源性多克隆抗体。方法 PCR法扩增hMCCP-Nl18基因片段，克隆至 pET28原核表达载体，转化大肠杆菌
Rosseta(DE3)。用异丙基．B．D．硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达 ，用Ni“-NTA凝胶亲和层析纯化 目的蛋
白。用纯化重组蛋白免疫小鼠，制备抗hMCCP-Nl18抗体。间接ELISA测定抗体效价，Westernblot鉴定抗体特异
性。结果 hMCCP截短体在大肠杆菌中高效表达，用纯化的重组蛋白免疫小鼠，获得了鼠抗 hMCCP-N118抗体，效
价达 1：6400，该抗体能特异结合hMCCP。结论 成功地制备了效价高、特异性好的鼠抗hMCCP截短体抗体。
[关键词] 肥大细胞羧肽酶；小鼠；肥大细胞羧肽酶截短体
[中图分类号] Q786 [文献标识码] A [文章编号] 1002-266X(2008)12-0017-03
Preparationandcharacterizationofthemousepolyclonalantibodyagainst
truncatedhumanmastcelIcarboxypeptidase
CHEN Zhang-quan，LU Tian—tian，HUANGZhen，LIANGXiao一面
(GuangdongMedicalCollege，Zhanfiang524023，P．R．China)
Abstract：0bjective Forfurtherdevelopinganassayforthedetectionofhumnamastcellcarboxypeptidase(hMC-
CP)byELISA，toexpressthetruncatedhMCCP (Nterminal110—227fragment，hMCCP-Nl18)nadtopreparethe
mousenatibodyagainstthehMCCP-N118．Methods TheDNA sequencecodingofrthehMCCP-N118WaSamplfiiedby
PCR andclonedintoprokaryoticexpressionvectorpET28．TherecombinnatplasmidpET28／hMCCP-N118wastransfomr ed
intoE．coliRosseta(DE3)nadexpressed tllIPTGinduction．TherecombinnatproteinhMCCP-N118WaSpurifide through
Ni -NTA agarosecolumnnadusde asimmunogentoimmumzethemouse．ThegeneratedantibodyWaS naalyzedbyindi-
rectELISA nadwesternblot．Results Th eturncatedhMCCPwassuccessfullyexpressedinE．coliandpurifiedsuccess-
fully．Th enatibodyagainsthMCCP-Nl18from mosuewasobtained，htetiterofwhichWaS 1：6400．Western blotshowed
htenatibodycouldbindwithhMCCPspecifically．Conclusion Th emousenati-hMCCP-Nl18natibodywiht hightiternad
hishspecificityhasbeenpreparedsuccessfully．
Keywords：humna mastcellcahtoxypeptidase；mouse；truncatedhumna mastcellcarboxypeptidase
肥大细胞中性蛋白酶是肥大细胞 中
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