人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体的构建及鉴定.pdfVIP

滨州医学院学报 2011年6月第 34卷第 3期 BMUJournal，Jun．2011，Vo1．34，No．3 ·161 · · 论 著 · 人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体的 构建及鉴定 张小华 刘向勇。 王跃嗣 牛新华 1滨州医学院生物技术教研室 烟台市 264003；2滨州医学院细胞生物学教研室 摘【要】 目的 构建人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体pEGFP—NI-haFGF。方法 PCR扩增人酸性成纤维细胞生长 因子(haFGF)基因，BgllI和HindⅢ双酶切后克隆入真核表达载体pEGFP-N1，构建haFGF真核表达载体 pEGFP—N1-haFGF，并 经限制性酶谱分析和DNA测序对重组表达载体的正确性进行鉴定。结果 重组真核基因表达载体 pEGFP—N1-haFGF经限制 性内切酶路 Ⅱ和HindⅢ酶切，DNA电泳显示465bp的haFGF目的片段和4700bp的pEGFP-N1载体片段，重组载体经DNA 测序显示所克隆的haFGF基因核苷酸顺序与Genbank中记载的haFGF序列一致。结论 本实验成功构建人酸性成纤维细胞 生长因子真核表达载体 ，为进一步研究haFGF的功能奠定基础。 【关键词】 人酸性成纤维细胞生长因子；pEGFP-N1载体；真核表达载体 【中图分类号】 R596 【文献标志码】 A 【文章编号】 1001-9510(2011)03-0161-03 Constructionandidentificationofeukaryoticexpressionvectorforhumna acidicfibroblastgrowthfactor ZHANG Xiaohua LIU Xiangyong WANG Yuesi NIU Xinhua 1DepartmentofBiotechnology，BinzhouMedicalUniversity，Yantai264003；2DepartmentofCellBiology，BinzhouMedicalUniversity 【Abstract】 0bjective Toconstructandidentifyeukaryoticexpressionvectorforhumanacidicfibroblastgrowthfactor(haFGF)． Methods ThehaFGFgenewasamplifiedbyPCR，digestedbyBglⅡandHind11I。thenthefragmentwasclonedintoeukaryoticex— pressionvectorpEGFP—N1．ThecorrectnessofrecombinantplasmidwasidentifiedbyrestrictionendonucleasedigestingandDNA se— quencing．Results TheeukaryoticexpressionvectorforhaFGFwasdigestedbyBglⅡ andH dⅢ ，andtheelectrophoresisofthedi— gestedproductsshowedtwofragments：4700bpfragmentand465bpfragment．TheresultofDNA sequencinganalysiswasconsistent withthesequencepublished in GeneBank．Conclusion Theeukaryoticexpressionvectorforhuman acidicfibroblastgrowthfactor pEGFP-N1-haFGFhasbeenconsturctedanditwillestablishthebaseofrstudyingitsfunctionandactivityinfuture． 【Keywords】 haFGF，pEGFP-N1vector，eukaryoticexpressionvector 成纤维细胞生长因子 (fibroblastgrowthfactor， 为深入开展haFGF的功能研