番茄中维生素E合成相关基因的VIGS载体构建及侵染.pdfVIP

北方 园艺2011(16)：139～142 ·生物技术 · 番茄中维生素 E合成相关基因的 ， ⅥGS载体构建及侵染 芦 亮 亮，傅 达 奇，刘 海 萍，王 晓 辉，罗 云 波，朱 本 忠 (中国农业大学 食品科学与营养工程学 院，北京 100083) 摘 要：以番茄为材料，采用RT-PCR技术从番茄果实中克隆了其体内维生素E合成相关基 因一生育酚环化酶 (Tocopherolcyclase E1)的部分序列，片段长420bp，序列分析表明，该基因 片段与番茄中生育酚环化酶 cDNA序列同源性为 95 ，然后通过 oI、KpnI2个酶切位点连接 E1片段和含 PDS的pTRV2质粒 ，获得 了重组载体 pTRV2一PDS_ E1，将该重组载体转化农 杆菌GV3101，并侵染番茄。该研究为下一步分析基因沉默后的番茄中维生素E含量的变化提供 试验材料；为今后通过转基因技术调节番茄果实的维生素E的合成奠定了基础。 关键词：番茄；维生素E；VIGS；基因沉默 ；载体构建 中图分类号 ：S641．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001—0009(2011)16—0139--04 番茄是全世界栽培最为普遍的蔬菜之一，食用方 迄今为止，已有烟草脆裂病毒 (TRV)[2]、马铃薯 X 便 ，和人类 日常膳食息息相关 ，全世界番茄年产量近 病毒 (PVX)L3]、番茄金色花叶病毒 (TGMV)、苹果潜隐 1．23亿 t。番茄果实中维生素 C(Vitaminc)含量丰富， 病毒 (ALSV)等 ，这些载体都已在本杰明烟草植物中成 每 100g番茄中含维生素 C14mg，为大家所熟知。但 功沉默八氢番茄红素脱氢酶基因(PDS)。其 中烟草脆 维生素 E(VitaminE)却很低，每 100g番茄中含维生 裂病毒 (TRV)感染番茄后 引起的病症十分轻微，不会 素 E0．49mg。维生素 E是一种脂溶性维生素 ，是最 掩盖 目的基因沉默表型，因此 ，该试验选择 TRV作为 主要的抗氧化剂之一，能促进性激素分泌，使男子精子 基因沉默载体 。 活力和数量增加 ；使女子雌性激素浓度增高，提高生育 由于TRV并不能诱导番茄植株 100 沉默 ，所 以 能力 ，预防流产 ，对于人体具有重要作用 ，俗称生育酚。 给取样带来一定难处 ，而且维生素 E合成相关基因的 研究表明番茄中存在维生素 E的生物合成途径 ，如果 沉默不能带来表型和颜色上的变化 ，为了克服这一问 能深入研究其合成机理 ，找到合成关键控制点 ，然后通 题，构建 Ⅵ 1和 PDS基因(／k氢番茄红素去饱和酶 过转基因技术就能显著提高番茄的维生素 E的含量， 基因)的共沉默载体 ，而 PDS沉默出现光漂 白现象[4]， 长期食用该类番茄，能有效提高人类健康水平。 便于V11E1基因沉默取样 ，为该研究提供便利。所 以 目前番茄基因组测序工作已经完成 ，VIGS技术的 该试验用 PDS基因作为报告基因，在含有 PDS基 因 迅速发展等都为研究如何从分子水平鉴定番茄果实中 的TRV载体中插入与维生素E合成相关的目的基因， 的维生素E合成的关键基因奠定 了基础。VIGS即病 构建沉默载体。 毒诱导的基因沉默 ，是指携带 目的基因片段的病毒侵 该试验以番茄为材料 ，克隆了番茄中维生素 E合 染植物后，可诱 导植物 内源 目的基因沉默，与对照相 成相关基因 1的片段 ，构建 了携带 1和 PDS 比，进而有效研究 目的基因的功能。VIGS技术具有方 报告基因的重组 TRV2病毒载体用于侵染番茄。旨在 法简单 、适用范围广 以及获取结果迅速等优点 ，已成为 为下一步分析鉴定