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福建农林大学学报(自然科学版) 第40卷 第4期
Journal0fFujianAgricultureandForestryUniversity(NaturalScienceEdition) 2011年7月
番鸭 cDNA-AFLP体系的建立
吴 旭，严美姣，刘丽平，连森阳，傅星源，王光瑛，李 昂
(福建农林大学动物科学学院，福建 福州350002)
摘要：以番鸭脑垂体为材料，用Trizol法提取总RNA，用SupersciptII-RT合成第一链 eDNA，RNaseH和DNAPolymerase合
成第二链 cDNA，最后用EcoRI／Mse1分步酶切cDNA各2h，经T|连接酶合成双链eDNA，预扩增反应后产物稀释加 倍进
行选择性扩增反应．经 l％琼脂糖电泳及6％变性聚丙烯酰胺凝胶 电泳检测的结果显示，番鸭脑垂体总RNA的提取及
eDNAA·l 预扩增和选择性扩增的效果 良好．番鸭 eDNA-AFLP反应体系的建立为番鸭就巢的分子机理研究奠定了基础．
关键词：番鸭；eDNAA·FLP；体系建立
中圈分类号：$834．2 文献标识码：A ‘文章编号：1671-5470(2011)04-0379-05
EstablishmentofcDNA．AIiI analysissystem formuscovyduck
WUXu，YANMei~iao，LIULi-ping，LIANSen-yang，FUXing-yuan，WANGGuang-ying，LIAng
(CollegeofAnimalScience，FujJna AgriculturenadForestryUniversity，Fuzhou，Fujina350002，China)
Abstract：ThecDNAamplifiedfragmentleIIgtlIpolymorphism (cDNA-AFLP)analysissystemofmuscovyduckwasestablishde U-
singpituitarya8materials．ThefirstsinglestrandcDNAwasgaindethrou#thereversetranscripti011fromhtetotalRNA．Thesecond
strandcDNAWaSsynhtesizedbyusingRNaseHnadDNApolymeraseIDNA．Double-strnadde cDNAwasdigestde completelyafter
2hdigestionbyEcoRInadMseIstepbystep，nadllgatde totwoadaptersbyT4DNAligase．Thepre—amplificationdilutedto
40timesforselectiveamplification．Theresultsof1％ agarosegeleelctrophoresisnad6％denaturingpolya~rylamidegelelectro-
phresis(PAGE)indicatde thathteRNAextraction，eDNA-AFLPpre-maplificationnadselect—maplificationbyaboveprocedures
wereeflective．TheeDNA-AFLP叭BlyBi8systemw鹳 establishdesuccessfully，whichprovidedplaftormformolecularmechanismof
broodinessofmuscovyduck．
Keywords：muscovyduck；cDNA-FLP；system estub lishmen
cDNA扩增片段长度多态性(cDNAamplifiedfragmentlengthpolymorphism，cDNA-AFLP)是一种基于
RNA指纹的基因表达谱的检测方法，可以用于分析不同条件下整个基因组的基因表达方式和功能，与基
于PCR的基因差异表达分析方法和DNA微排阵法相比，具有多态性丰富、稳定性高、假阳性低、灵敏度高
以及无需了解序列信息等优点[1]．研究表明，c
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