山羊草属杀配子染色体2C特异SCAR标记的建立.pdfVIP

第 2O卷 第 4期 草 业 学 报 3O5— 31O Vo1．2O，No．4 ACTA PRATACULTURAESINICA 2011年 8月 山羊草属杀配子染色体 2C特异 SCAR标记的建立 徐国辉 ，郭长虹 ，于洪涛 ，陈静 ，丛雯雯 ，远藤隆 (1．哈尔滨师范大学生命科学与技术学院 黑龙江省分子细胞遗传与遗传育种重点实验室 ，黑龙江 哈尔滨 150025 2．日本京都大学农学部植物遗传学实验室 ，日本 京都 60685O2) 摘要 ：用 4O条 1O碱基随机引物 ，对普通小麦 “中国春”、“中国春”一杀配子染色体 2C二体 附加系、柱穗 山羊草进行 RAPD分析 ，筛选到 1个杀配子染色体 2C特异引物 OPF03。从 “中国春”一杀配子染色体 2C二体附加系 中克隆了 该 DNA片段 。测序结果表明，该片段长 1496bp，与大麦 1个 cDNA 的同源性为 92 。根据 OPF03。e的序列设 计 了 1对 SCAR引物 2C—F一、2C—R一，对普通小麦 “中国春”、“中国春”一杀配子染色体 2C二体 附加系、柱穗 山羊 草、二倍体长穗偃麦草、“中国春”一长穗偃麦草 7E二体附加系等材料进行 了SCAR分析 ，在 “中国春”一杀配子染 色体 2C二体附加系、柱穗 山羊草中扩增 出了586bp的片段 ，而在普通小麦 “中国春”、二倍体长穗偃麦草、“中国春” 一 长穗偃麦草 7E二体 附加系中没有该产物 ，初步证 明此标记可 以用于杀配子染色体 2C 的检测 。进一步用该对 SCAR引物对 “中国春”一杀配子染色体 2C二体 附加系与 “中国春”一长穗偃麦草 7E二体 附加系的杂种 F 代 、F。 代进行 了分析 ，结果在全部 F 代以及部分 F 代材料扩增 出了 目的片段 ，进一步证 明了此 SCAR标记可 以用来检 测小麦背景下的杀配子染色体 2C，为小麦背景 中杀配子染色体 2C的快速跟踪检测提供 了新途径 。 关键词 ：山羊草 ；杀配子染色体 ；RAPD；SCAR 中图分类号 ：$543 ．903．2；Q943．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—5759(2011)04—0305—06 山羊草属 (Aegilops)植物的一些染色体，当单体附加到不同基因型普通小麦 (Triticumaestivum)中时，具 有完全或不完全的杀配子作用[1]。在不完全杀配子作用下，可高频诱导各种类型的染色体结构变异，变异频率 可达 1O 以上 ，远远高于 自发易位 、辐射诱发 、P 基 因等其他方法的诱导效率 ]。杀配子染色体不仅可诱导普 通小麦染色体结构变异 ，而且对附加或代换到普通小麦中的外源染色体也具有同样的功能[3]，这就为小麦的诱变 育种开辟 了一条新途径 。 杀配子染色体 2C在普通小麦 “中国春”等遗传背景下可诱导半致死效应的染色体断裂，使后代产生易位、缺 失等染色体结构畸变 ]。利用杀配子染色体 2C在构建大麦 (Hordeumvulgare)染色体缺失图谱_5]，诱导小麦一 冰草 (Agropyron)E63易位等方面取得了很好 的成效 。在杀配子染色体 2c的利用过程 中，杂种后代中2C染色体 的鉴定是非常重要 的环节。有很多学者利用分带的方法对后代进行鉴定 ，但该方法非常繁琐 ，而且需要结合相关 的细胞学技术 。与之相 比，利用 DNA分子标记进行鉴定则是十分方便快捷的途径 。 随机扩增多态性 DNA(RAPD，randomamplifiedpolymorphicDNA)技术具有操作简单 、模板 DNA用量少 、 扩增产物多态性高、经济快捷等优点，已经被广泛应用于遗传多样性分析 ]、品种鉴定_9]、分子标记辅助育种、基 因定位及遗传 图谱构建等多个研究领域 。将 RAPD标记转化为 SCAR(sequencecharacterizedamplifiedregion) 标记后 ，其特异性和稳定性大幅度提高 ，可以更方便快捷地应用于异源染色体的检测口 。 为了获得杀配子染色体2C的特异分子标记 ，本研究利用 RAPD技术进行了杀配子染