老瓜头悬浮细胞培养及其生长特性的研究.pdfVIP

江苏农业科学 2008年第6期 老瓜头悬浮细胞培养及其生长特性的研究 谢亚军，胡海英，李 鹏 (宁夏大学生命科学学院，宁夏银川750021) 摘要：以老瓜头嫩茎为材料诱导出愈伤组织，在光照和黑暗条件下进行愈伤细胞的悬浮培养 ，每隔2d取样测定相关的生理生化 指标。结果表明，老瓜头悬浮细胞的生长曲线呈 “s”形，在黑暗条件下生长周期为18d，弱光条件下24d，说明黑暗有利于老瓜头细胞 生长；在细胞悬浮培养过程中，不同培养条件下，细胞培养液pH值的变化趋势相似，即先下降后上升；老瓜头细胞中可溶性蛋白质的含 量变化与细胞生长呈负相关，过氧化物酶活性与细胞生长活力的变化呈正相关 。 关键词：老瓜头；悬浮培养；细胞生长；生长特性 中图分类号：R282．1 文献标志码 ：A 文章编号：1002—1302(2008)06—0079—02 老瓜头(CynanchumkomarroviiAI．njiniski．)是萝摩科鹅 1．2 方 法 绒藤属植物，多年生草本。生物学特性为强旱生适阳植物，喜 1．2．1 细胞悬浮培养 对诱导出的愈伤组织进行继代培养， 光、耐高温，在沙化过程中适应环境而保存下来的沙漠生态型 每 15d继代 1次，经 1次继代后 ，选择生长旺盛、分散性好的 植物。广泛分布于我国内蒙古、山西、陕西、宁夏、甘肃、青海 愈伤组织进行细胞悬浮培养。每 150ml三角瓶中分装50fnl 等省(区)，生长于荒漠草原、沙质平原、半固定沙丘、干河床 液体MS培养基，每瓶接种量约为2g，悬浮振荡培养，转速为 等沙漠与黄土丘陵的过渡地带，是一种较为丰富的野生植物 130r／min，温度为(25±2)℃。经 1次继代后，得到种子细 资源 。老瓜头根中有效成分种类丰富，含有的总生物碱 胞，再在每瓶接种2g种子细胞，分别置于弱光和黑暗条件下 具有抗炎、镇痛、增强免疫功能的药理活性 。试验发现老 培养，进行细胞生长量及其他指标的测定。 瓜头毒素液对蚜虫有很好的喷施毒杀效果 ，利用一定浓度的 1．2．2 细胞生长量及生理生化指标的测定 接种后每隔2d 老瓜头总碱为农药 ，对桑天牛和菜青虫也有较好 的毒杀效 取弱光和黑暗条件下培养的悬浮培养细胞各3瓶 ，过滤后称 果 。老瓜头作为药用植物，在中成药研制开发中具有广泛 其鲜重 ，绘出生长曲线。细胞鲜重 ：鲜细胞和湿滤纸的质量 的应用前景，其抗风固沙的优 良特性，在植被建设中有重要作 一 湿滤纸的质量。 用 J。国内外对老瓜头的研究只限于防风固沙及作为野生 悬浮细胞培养液pH值采用酸度计直接测量；细胞可溶 优良蜜源植物和农业杀虫剂等方面I。有关老瓜头组织培 性蛋白的含量采用考马斯蓝染料结合法 测定，以牛血清蛋 养方面的文献报道很少 ，老瓜头细胞悬浮培养 尚未见报 白作标准曲线，单位为ms／g ，牛血清蛋 白标准曲线：Y= 道。本试验初步探讨了老瓜头细胞悬浮培养过程中细胞生长 0．6696x一0．0008，r=0．9979；过氧化物酶活性采用愈创木 及活力与过氧化物酶活性之间的关系，为老瓜头有效成分的 酚法测定 ；细胞活力采用氯化三苯四氮唑(Trc)还原法测 利用和研究提供参考。 定 ，Trc还原量[ms／(g·h)]=Trc总还原量／样 品 × 时间。 1 材料与方法 2 结果与分析 1．1 材料及处理 供试植物材料为老瓜头，采 自宁夏盐池县境内。取老瓜 2．1 不同光照条件对老瓜头悬浮细胞生长的影响 头嫩枝剪成0．5一lcm的茎段 (带腋芽)，用洗衣粉水浸泡， 从图1可以看出，在2种光照条件下，老瓜头悬浮细胞的 流水冲洗干净，滤纸吸干，置于超净工作台上，70％乙醇浸泡 生长曲线