重组蛋白药物C末端不同长度氨基酸序列的质谱分析.pdfVIP

药物分析杂志ChinJPharmAnal2011，31(6) ★ 论 著 ★ 重组蛋白药物 C末端不同长度氨基酸序列的质谱分析 李萍，赵永强，薛燕，刘锋，刘炳玉，何 昆，王红霞 (国家生物医学分析中心，北京 100850) 摘要 目的：基于本实验室已建立的溴化氰裂解蛋白质C末端方法结合优化后的质谱检测技术 ，对 C末端长度分别为2～37 个氨基酸，相对分子质量在 200～5000的8个重组蛋白药物进行检测。方法：(1)针对重组蛋 白药物的不同状态 (SDS— PAGE、干粉或溶液)分别进行 C末端胶内或溶液裂解；(2)质谱检测，正离子方式，雾化气为氮气 ，碰撞气体为氩气。源温80 ℃，锥孔电压50V，MCP检测器电压为2．15kV。结果：8个重组蛋白药物的C末端全部成功检测出，且基本为基峰。结论：建 立的重组蛋白药物 C末端测序联用方法应用于实际药物的检测具有很高的实用价值和学术意义。 关键词：溴化氰裂解；ESI—MS／MS质谱技术；C末端测序 中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：0254—1793(2011)06—1003—05 M assspectrometryanalysisofrecombinantprotein drugs withC —terminalaminoacid sequenceofdifferentlengths LIPing，ZHAO Yong—qiang，XUE Yan，LIU Feng，LIU Bing—yu，HEKun，WANG Hong—xia (NationalCenterofBiomedicalAnalysis，Beijing100850，China) Abstract 0bjective：BasedonthemethodestablishedbycyanogenbromidecleavageofproteinsC—terminalCOB— binedwiththeoptimizedmassspectromet~7 inourlaboratory，detectionofC —terminallengthsof2to37amino acids，relativemolecularmass200—5000ofthe8recombinantproteindrugs．Methods：(1)Fordifferentstatesof recombinantproteindurgs(SDS—PAGE，drypowderorsolution)toCtemrinalcleavageingelorsolution，respec— tively．(2)Massspectrometry detection，positiveionmode，atomizationgaswasnitrogen，collisiongaswasargon， sourcetemperature80oC，corevoltage50V，MCPdetectorvoltageof2．15kV．Results：AllofC—terminalofthe8 recombinantproteindurgssuccessfully detectedasthebasepeak．Conclusions：TheestablishedC —terminalse— quencingmethodoftherecombinantproteinwasappliedtotheactualdrugstesting，havehigh practicalvalueand academicsignificance． Keywords：cyanogenbromidecleavage；ESI—MS／MStechnique；C—terminalsequenceing 随着基因工程和重组蛋 白药物工程 的发展，越 为止，重组蛋 白药物 C末端测序方法还没有成熟 来越多的重组蛋 白药物不断研发并走向市场。为保 的，能够广泛应用的方法 ．3J。这为重组药物的报 证重组蛋白药物的质量 ，对数据的严谨性和涵盖范 批带来了很大的困扰，因此建立重组蛋 白药物C末 围的要求不断提高，国家食品药品监督管理局规定： 端测序方法并应用