全人源抗Met双价抗体的制备与特性分析.pdfVIP

中华临床医师杂志(电子版)2008年 l2月第2卷第 l2期 ChinJClinicians(ElectronicVersion)，December15，2008，Vo1．2，No．12 · 实 验 研 究 · 全人源抗 Met双价抗体的制备与特性分析 徐凛峰 朱进 唐奇 张大为 曹伯 良 管晓虹 【摘要】 目的 以抗HGF受体Met特异性的全人抗体Fab基因为模板，合成并表达双价抗体 Diabody。方法 以天然抗体库中筛选出的Fab基因为模板，分别扩增抗体的重链可变区与轻链可变 区基因，经重叠拼接合成Diabody基因，克隆于原核表达载体 pBAD／gⅢA中表达。在不同的培养条 件下，阳性克隆经 IPTG诱导表达，ELISA、SDS．PAGE、Western．blot和细胞免疫荧光分析。结果 培养 基成分和诱导剂的浓度对 目的蛋白的表达未见有明显的影响，低温诱导能够促进可溶性蛋白的产生； 但电泳与印迹分析表明，在29kD出现预期大小蛋白条带。双价抗体经表达、变性与复性和 IMAC亲 和纯化后，用细胞免疫荧光分析表明，Diabody能够与Sll4细胞表达 Met的胞外 区特异性结合。 结论 本研究制备的双价抗体能够与其抗原特异性结合，该抗体有望与其他抗体分子结合，制备双特 异性抗体 ，为肿瘤临床诊断或治疗提供候选分子。 【关键词】 抗肿瘤药；原癌基因蛋白质c—met；抗体； 基因表达 Preparationandcharacterizationofhumannati-Metrecombinantantibodydiabody XULin-feng， ZHUJin ，TANGQi，ZHANGDa—wei，CAOBo—liang，GUANXiao—hong． HuadongMedicalInstituteof Biotechniques，Nanfing210002，China Correspondingauthor：ZHUJin，Email．zjsimmons@yahoo．tom．cn A【bstract】 Objective Thispmjectistodevelopfullyhumanantibodyfragmentdiabodythat specificallybindtocellreceptorMet．Methods Thevariableregiongeneswereamplifiedfrom VH andVL ofanti—MetFabselectedfrom nativeantibodydisplay library．Thediabodygeneswereamplifiedbyoverlap PCRwithVH andVLgene．Diabodygenewaspurified and digestedand inserted intopBAD—gII[／A． Results TheconfirmeddiabodygenewasclonedintopBAD—gllI／A forexpression．Diabodywasverifiedby ELISA，SDS—PAGE，W estern—blotandcellimmuno·fluoresencedetection．Theresultsshowedthatonebandat about29kD attheexpectedsize，butmostininclusivebodyform．Toanalyzetheimmunologicalcharactersof diabodyforMetbinding，fluoresenceassaysweresetupandcarriedoutwithS114andNIH3T3celllines．The resultsdemonstratediabodycouldbindnativeMetspecificallyontheS114cellsurface．Conclusions Th e resultsshowedthatanti—MetdiabodyantibodyfragmentcouldrecognizeMetextracellulardomain innative conofrmation．Itcould beapotentialpowerfullyreagentsbispecficantibodyandforclinicaldiagnosticand therapeuticapplication．