高效液相色谱-蒸发光散射检测法直接检测20种未衍生基本氨基酸.pdfVIP

第 9期 王玉红，等：高效液相色谱一蒸发光散射检测法直接检测20种未衍生基本氨基酸 ‘909 · light—scatteringdetection (ELSD)；underivatizedaminoacids；aminoacids；injection 氨基酸是含有一个或多个碱性氨基和酸性羧基 氨基酸标准品：甘氨酸 (Gly)、丝氨酸 (Ser)、天 的有机化合物 ，是生物功能大分子蛋 白质 的基本组 冬氨酸 (Asp)、谷氨酰胺 (Gln)、苏氨酸 (Thr)、丙氨 成单位 ，是构成动物 营养所需蛋 白质的基本物质。 酸 (Ala)、谷 氨酸 (Glu)、半胱 氨 酸 (Cys)、脯 氨酸 迄今为止，自然界 中已发现 300多种氨基酸 ，其 中参 (Pro)、胱氨酸 (Cys—Cys)、赖氨酸 (Lys)、组氨酸 与蛋白质合成 的氨基酸 只有 20种 ，称为基本氨基 (His)、缬 氨酸 (Va1)、精 氨酸 (Arg)、甲硫 氨酸 酸。由于大多数氨基酸的极性高 、挥发性低 、无强发 (Met)、酪氨酸 (Tyr)、异亮 氨酸 (Ile)、亮 氨酸 色基团，造成其分离和检测 比较 困难。 目前常用的 (Leu)、苯丙氨酸 (Phe)、色氨酸 (Trp)(纯度大于 方法为氨基酸 自动分析仪 和柱前衍生反相高效 99．0％，Acros公司)；三氟 乙酸 (TFA)(纯度大于 液相色谱法 (RP—HPLC) 等 。前者存在仪器 昂 99．5％，美 国 TEDIA公 司)；七 氟 丁 酸 (纯度 大 于 贵 、运行费用高等不足，后者则经常出现衍生物不稳 98．0％，哥伦 比亚 MatrixScientific公司)；甲醇 (色 定、反应条件繁琐 、操作时间长等问题 ，不利于氨基 谱纯 ，国药集 团上海化学试剂有限公司)；水为二次 酸的快速分析。基于这些 问题 ，未衍生氨基酸的直 蒸馏水 ；其他试剂均为分析纯 。l5一氨基酸注射液 接分离检测受到 了人们 的普遍关注。Bongiovan— (江苏 四环生物股份有 限公司)。 ni… 利用蒸发光散射检测器 (ELSD)进行了未衍生 1．2 标准品混合溶液及供试品溶液的制备 氨基酸的分离检测。Petritis等 对未衍生氨基酸 分别称取除胱氨酸外的其他 l9种氨基酸标准 的分离检测工作进行了总结。国内也有利用进 口品 品适量 ，置于同一容量瓶 中，加 0．01mol／L盐酸溶 牌 ELSD对未衍生氨基酸进 行分离检测 的相关报 液溶解配制成各氨基酸质量浓度均为 1．0g／L的标 道 。鄢丹等 用Alltech2000ES型ELSD直 准品混合溶液。称取胱氨酸标准品适量 ，置于一容 接检测 了 l7种 未衍生氨基 酸；王雅 玲等 用 量瓶中，加 0．1mol／L盐酸溶液溶解后 以二次蒸馏 SEDEX一75型ELSD直接检测了6种游离氨基酸。 水定容 ，配制成胱氨基酸质量浓度为 1．0g／L的标 ELSD是一种 自上世 纪 90年代开始得到广泛 准品溶液。两者用前混合。 应用 的新型通用型高效液相色谱质量检测器 ，其原 将 15一氨基酸注射液以二次蒸馏水稀释40倍后 理是基于将色谱柱洗脱液雾化形成气溶胶 ，然后在 备用。 加热的漂移管中将溶剂蒸发 ，最后余下 的不挥发性 1．3 色谱条件 溶质颗粒在光散射检测池中得到检测 。相比紫外检 BISCHOFF C18AQPLUS色谱柱 (250mm 测器 ，ELSD具有更高的通用性 ，其响应不依赖于样 ×4．6mm，5 m)。流动相 ：A 相为七氟丁酸一 品的光学性质，不受物质本 身结构 的限制。 由于 TFA一水 (1．0：0．5：500，v／v／v)，B