工业制备高效液相色谱法制备淫羊藿中的黄酮系列对照品.pdfVIP

第 9期 高明哲，等：工业制备高效液相色谱法制备淫羊藿中的黄酮系列对照品 。933 · 中药化学对 照品是药品检测 中使用 的参 比物 仪 (美 国Thermo—Fisher公司)；上海 申生 1001型旋 质，用于确定 中药的真伪 和评 价药 品质 量的优劣。 转蒸发器。实验数据通过 JS一3070工作站 (大连江 我国现行中药质量控制采用单一化合物含量测定的 申分离科学技术公司)采集并处理 。 方法进行质量控制 ；而更加符合 中医药理论 的多指 制备柱的装填 ：在 550gl0 m 的 Chromator— 标成分的质量控制方法也在推广 ，如 2005年出版的 exC．填料中加入 甲醇配制成300g／L的匀浆液，超 《香港 中药材标准》中规定采用人参皂苷 Rbl、Rc、 声脱气2次，每次 l0rain。超声脱气时摇动匀浆液 Rf、Rgl、F11和 Re等 6种活性成分进行人参质量 避免填料沉降。将处理好的匀浆液倒人预先安装好 控制 ；采用黄芪皂苷 IV等 5个特征指纹峰进行黄芪 柱头压缩活塞 的柱管中，迅速安装柱尾密封后 ，在 7 指纹图谱鉴别… 。中药材单成分 、多成分和指纹 图 MPa(1000psi)下压缩 ，即获得制备柱 。 谱质量控制都需要大量的中药化学对照品。 总黄酮类含量为20％的淫羊藿提取物 (西安小 淫羊藿是一味使用历史悠久 的中药 ，具有补 肾 草植物科技有限公司)；淫羊藿甙、朝藿定 C对照品 阳、强筋骨、祛风湿 的功效 ，其活性成分为黄酮类化 (供含量测定用 ，中国食品药品检定研究 院)，乙腈 合物 ，包括淫羊藿甙 (icariin)、朝 藿定 (epimedin) (色谱纯 ，美 国ThermoFisher公司)；实验用水 由 A、B、C(见图 1)等。 《中国药典》(2010年版)规定 Milli—Q超纯水系统制备。 以淫羊藿甙为对照进行总黄酮和淫羊藿甙含量的测 1．2 样 品分析 定 ，以朝藿定 c为对照进行巫 山淫羊藿含量 的测 取少量淫羊藿提取物用 甲醇溶解配制成质量浓 定 。 目前 ，中国食品药 品检定研究 院仅可以提供 度为 1g／L的溶液 ，采用高效液相色谱一紫外检N ／ 含量测定用的淫羊藿甙和朝藿定 C对 照品，缺少其 质谱法 (HPLC—UV／MS)测定提取物的组成 。 他黄酮类化学对照品用于系统的质量控制。淫羊藿 HPLC条 件 ：HypersilC18柱 (250mm ×4．6 中的黄酮类成分可 以通过硅胶柱色谱 、逆流色谱等 mE，5 m，大连依利特分析仪器有 限公司)；流动 多种方法制备 ，其 中反相液相色谱分离制备淫 相 ：乙腈一水 (30：70，v／v)；流速 ：1mL／min；检测波 羊藿黄酮类成分已有文献报道，但所得产物 的纯度 长：254nln；进样量 ：10 L。 低 ，仅可以作为定性鉴别用 ，或仅进行单一化合 MS条件 ：电喷雾电离 (ESI)源 ，正离子模式检 物的制备 ，不能 同时完成系列对照品的制备 。本 测 ；氮气作为夹套气和辅助气 ，夹套气压力为 276 研究采用制备型反相高效液相色谱法 (RP—HPLC)， kPa(40psi)，辅助气流量为 20an，加热毛细管温 在 35rain的分离时间内完成淫羊藿中4种黄酮类 度为 300℃ ，雾 化温 度为 400℃ ，喷雾 电压为 4．5 对照品的分离 ，制备获得 了纯度大于 98％的淫羊藿 kV，粒子扫描范围为 m／z300～1200，进样分流 比 甙和朝藿定 A、B、C对照品。本方法高效快速 ，所得 为 1：4。 产品纯度高 ，适于淫羊藿黄酮系列对照品的制备。 1．3 样品粗分离