含有增强型绿色荧光蛋白报告子的载体系统的构建.pdfVIP

72 ．孥 Jm gAg． Bi。。i 20D0e8c年．，122o@月 文章编号 ：1008—3464 (2008)04—0343—06 含有增强型绿色荧光蛋白报告子的载体系统的构建 姜伯乐 一，一赵宇 ，刘建元。，苏莉莉 ，刘娇 ，王爱勤。， 周琼。，李素丽。，陆凤花 ，蒋建荣 ，唐纪 良 (1 广西大学 生命科学与技术学院，广西 南宁 530005；2 广西亚热带生物资源保护利用重点实验室， 广西 南宁 530005；3 广西大学 农学院，广西 南宁 530005；4 广西大学 动物繁殖研究所 ，广西 南宁 53OOO5) 摘要：将增强型绿色荧光蛋 白基因编码序列克隆到不含启动子 的载体 pLAFR6上，构建报告质粒 pLZY。将野油菜黄单胞菌的已知效应物基 因xopXccN启动子和分泌转运信号区序列克隆到 pLZY，重组 质粒导入野油菜黄单胞菌，阳性克隆细胞在荧光显微镜下呈现绿色荧光 。阳性克隆接种萝 叶片，在共聚 焦激光扫描显微镜下检测观察到在植物细胞 内发荧光 ，而含有 pLZY的野油菜黄单胞菌对照菌株菌体和植 物细胞内都检测不到绿色荧光，证明报告质粒 pLZY工作正常。该报告质粒为研究 目的基因在不同宿主中 的表达和研究植物病原细菌Ⅲ型效应物蛋 白的植物亚细胞定位提供 了材料 。 关键词：增强型绿色荧光蛋 白；报告质粒 ；效应物；亚细胞定位 中图分类号：Q782 文献标识码：A Constructionofaplasmidsystem containingreporterofenhanced green fluorescentprotein JIANGBo-le ，ZHAOYu，LIU Jian-yuan。，SU Li—li，LIUJiao，WANGAi—qing。， ZHOU Qiong。，LISu—li。，LU Feng—hua，JIANG Jian-rong ，TANG Ji—liang’。 (1 CollegeofLifeScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China； 2 GuangxiKeyLaboratoryofSubtropicalBioresourcesConservationandUtilization，Nanning530005，China； 3 College0fAgriculture，GuangxiUniversity，Nanning530005，China； 4 AnimalReproductionInstitute，GuangxiUniversity，Nanning530005，China) Abstract：Thecodingsequenceofenhancedgreenfluorescentprotein (EGFP) wasclonedinto thepromoterlessvectorpLAFR6，generatedthereporterplasmidpLZY．Thepromoter，secretionand translocationsignalofxopXccN，aknowntypeⅢ effectorinXanthomonascampestris，werecloned intopLZY．TherecombinantplasmidwastransferredtoXanthomonascampestrisand inoculated in radish．Greenfluorescencewasobserved i13．thepositivecoloniesunderfluorescentmicroscopyand in theplantcellunderconfocallaserscanningmicroscope．ItconfirmedthatthereporterplasmidpLZY workwel1．Thisreporterplasmidprovidesusefulvesselto study theexpressionoftargetgenesin differen