环介导等温扩增法快速检测结核杆菌复合群内主要致病菌.pdfVIP

· 论 善 · 环介导等温扩增法快速检测结核 杆菌复合群 内主要致病菌 洪 明 查 磊 付文亮 邹民吉 李伍举 吴奎武 徐 东刚 摘 要 目的 快速诊断和区分结核杆菌复合群内两种主要致病菌。方法 利用环介导等温扩增 (LAMP)技术建立快速检 测和区分结核杆菌复合群内主要致病菌的方法 ，利用该方法对相关的临床分离株样本进行特异性检测 ，并利用 1：10倍 比稀释 的 已知菌株 DNA模板分析其敏感性 。反应结束后通过电泳或 向反应管中加入 DNA染料 肉眼判定检测结果。结果 该方法可 以 成功检测到主要的结核致病菌 ：人型和牛型结核分枝杆菌 ，与包括卡介苗在 内的其余相关菌株均未见非特异性交叉反应 。检测 的灵敏度可达 10。拷 贝／微升 ，高于常规 PCR方法。结论 该检测方法具有敏感、特异 、低成本和快速的特点，可检测和区分人型 和牛型结核分枝杆菌，并能排除卡介苗对诊断的干扰 。 关键词 环介导等温扩增 快速检测 结核分枝杆菌复合群 卡介苗 RapidDetectionoftheMainPathogensofMycobacterium TuberculosisComplexbyLoop—mediatedIsothermalAmplificationAssay． Hong Ming，ZhaLei，FuWenliang，ZouMinji，LiWuju，XuDonggang．InstitutionofPreclinicalMedicine，AcademicofMilitaryMedicalSci— ence，Be ng100850，China Abstract 0bjective TodetectetwokindsofmainpathogensofMycobac—terium Tuberculosiscomplexrapidly．Methods We detectedtwelvekindsofbacteriasamplesbyLoop—MediatedIsothermalAmplification(LAMP)andvalidatedthesensitivityofLAMPby serialdilutedDNAtemplates．Theresultswerejudgedwithnakedeyesandelectrophoreticanalysis．Results Thepositivesignalwasonly observedinMtuberculosisvar．hominisand M．tuberculosisvar．bovis，andnopositivesignalwasobservedfortheotherbacteria inthe test．Thedetectionlimitoftheassaywas1copy／~1．Conclusion ThisLAMPassayhasmanyadvantagessuchasspecificity，sensitivity andsimplicity．Itisusefulofrrapiddetection oftuberculosis，especiallyin avoidingtheinterferenceofBCG． Keywords Loop—mediatedisothermalamplification assay；Rapiddetection；Myc0bacterium tuberculosiscomplex；BCG 结核病是一种严重危害人民健康的传染性疾病 ， 周期较长 (4～8周)，同时由于许多结核患者体内存 能够在人和动物之间产生交叉感染 ，它具有很长的潜 在的结核分枝杆菌为 L型结核菌，该菌种使用传统的 伏期 ，即机体受结核分枝杆菌感染之后可能经过一段 细菌培养方法无法检 出，从而 降低 了结果 的可靠 时间后才出现病症 。结核杆菌感染人之后主要侵犯 性 。另外 ，一些新兴的诊断技术诸如 PCR、血清学 肺脏 ，引起 咳嗽、咯血及一系列全身 中毒症状 。结核 方法等由于其操作复杂、试剂盒及所需检测设备昂贵 病患者可长期处于感染状态 ，他们虽然没有活动性结 而导致这些方法大多仅用于发达国家的实验室 “。 核那样强烈的传染性 ，但依然是潜在的结核传染