大肠癌组织中TMS1基因甲基化状态及其意义.pdfVIP

山东医药2011年第 51卷第 32 大肠癌组织中TMS1基 因甲基化状态 及其意义 周炳喜 。韩双印，张延瑞 ，杨玉秀 (河南省人民医院，郑州 450003) 摘要：目的 探讨大肠癌组织中TMS1基冈的甲基化状态及其临床意义。方法 采 基化特异性聚合 钮 反应技术，检测38例大肠癌组织及 38例正常结肠组织TMS1基 冈的甲基化状态。结果 大肠痛组织、J常鲇肠绀 织中TMS1基因甲基化阳性检出率分别为24％(9／38)、0，P0．05。结论 大肠癌组织 巾存在 TMS1 l夫l高 {【{ 化，这可能是导致该基因沉默的重要原因，并在大肠癌的发病机制中发挥重要作用。 关键词 ：结直肠肿瘤；TMS1基因；甲基化 中图分类号 ：R735．3 文献标志码：B 文章编号：1002—266X(2011)32~052—02 正确维持 甲基化状态是生长发育过程中所必需 加少许石蜡油避光 50℃水浴 16h。 的，肿瘤 的发生与 甲基化状态发生异常相关，表现为 1．2．3 DNA纯化 WizardDNA纯化试剂盒 (Pro— 全基因组广泛低甲基化和某些抑癌基因启动子 CpG mega公司)纯化 ，回收后 的DNA溶于5() l舣蒸水 岛的高 甲基化 ¨J。TMS1基因为抑癌基因，其 甲基 中，离心 1min，加人终浓度为3mol／i的NaOtt5．5 化使TMS1基因表达沉默。本研究采用 甲基化特异 l，室温放置 5min终止反应，加入 l l糖原、l7 I 性聚合酶链反应 (MS．PCR)技术检测 38例大肠癌 17．5mol／L醋酸铵、3倍体积的无水乙醇，一80 放 组织TMS1基因启动子 甲基化状态并与正常结肠组 置2h，离心去上清，70％乙醇500txl洗涤，离 t~,lS 织相对 比，以探讨 TMS1甲基化与大肠癌发生 的关 去上清，加 20 l双蒸水溶解。 系。 1．2．4 MS—PCR Q液5．0txl，10mtl1ol／IJ的dNrIJS 1 材料与方法 0．5ILl，Bufer2．5txl，20txmol／L的引物各0．5 I，修 1．1 材料 选择我院 2008年 11月 ～2009年4月 饰后 的DNA4．0ILl，HotstarTap酶0．2 l。rMS1 手术切除的38例大肠癌及其距肿瘤边缘 3on的正 因非 甲基化 引物 ：正链 ：5 GGAGGTGGGGA(r— 常结肠组织的石蜡冰冻标本 。38例 中男23例、女 TAGG1_IvIG删 。3，反 链 ：5一AAITCTCCAACA— l5例，年龄 28～88岁、平均 53岁。大肠癌组中直 CATCCAAAATAACATCA．3，扩增 长度 为 272llI) 肠癌 21例、结肠癌 17例 ；病理结果：管状腺癌8例、 TMS1基 因 甲基化特异性 引物 ：正链 ：5一GCG((— 乳头状腺癌2例、管状乳头状腺癌 6例、黏液腺癌4 GAG 丌AGG1_1TrCG1_IvrC一3，反 链 ： 5一CCAA(：(— 例、管状黏液腺癌 3例、乳头状黏液腺癌 1例、印戒 CATCCAAAATAACGTCG一3，扩增长度为 207bp 细胞癌 1例、低分化腺癌 6例、中分化腺癌 6例、高 PCR程序 ：96℃ 3min，96℃ 30S，60oC30S，72 分化腺癌 1例。根据 UICC标准 TNM分期 ，I期 6 30S，共25个循环，最后延伸72℃4rain，．退火温度 例、Ⅱ期 18例、Ⅲ期 14例 。正常结肠组织病理未发 64 ，以正常人外周血淋巴细胞 DNA做阴性对照， 现肿瘤细胞，所有患者均未接受过放化疗。所有标 水做空白对照，2％的琼脂糖凝胶行 电泳分析 本在 DNA提取前置于一80℃低温冰箱保存。 1．3 统计学方法 采用 S