大肠杆菌DH5α菌株感受态制备及转化率变化研究.pdfVIP

第28卷第4期 生 物 学 杂 志 Vol_28 No．4 2011年 8月 JOURNALOFBIOLOGY Aug，2011 doi：10．3969／j．issn．2095—1736．2011．04．004 大肠杆菌DH5oL菌株感受态制备及转化率变化研究 谢 翎 一，陈红梅 ，尹 狮 ，项小燕 ，黄 勃 (1．安庆师范学院生命科学学院，安庆 246011；2．安徽农业大学微生物防治省重点实验室，合肥230036) 摘 要：通过氯化钙法制备大肠杆菌DH5a菌株感受态，讨论了不同保存温度和保存时间对感受态转化率的影响。 结果表明，在4~C下保存，8h达到最高转化率；在 一20℃和一70℃下保存，均为48h达到最高转化率。通过氯化钙法 制备的DH5a菌株感受态细胞，在一20℃条件下简单保存 ，20d内完全可以满足一般转化研究的要求，不需要复杂 的甘油、液氮处理及超低温要求。 关键词 ：大肠杆菌；DH5ct菌株；感受态；转化率 中图分类号：Q939．9 文献标识码：A 文章编号：2095—1736(2011)04—0004—03 Studyon variation oftransformation rateofE．coliDH5c~competentcells XIE Ling。一 CHENG Hong—mei，YIN Chong ，XIANG Xiao—yan ，HUANG Bo ， (1．SchoolofLifeSciences，AnqingTeachersCollege，Anqing246011；2．AnhuiProvincial KeyLaboratoryofMicrobialPestControl，AnhuiAgriculturalUniversity，Hefei230036，China) Abstract：ThecompetentcellsofE．coliDH5a strainwerepreparedbycalcium chloride，andthevariationoftransformationratefor differenttreatmenttemperaturesandtimeswasdetected．Experimentalresultsshowedthatthetransformation rateofcompetentcells storedat4℃ reachedmaximum ofr8hours．Andthetransfomr ationratesreachedmaximum ofr48hours．whentheywerestoredat 一 20~C and 一70℃ ．ThecompetentcellsofE．coliDH5o~strain preparedbycalcium chloridecouldsatisfygeneralresearchneeds whentheywerestoreddirectlyat一20℃ within20days． Keywords：Escherichiacoli；DH5a strain；competence；transformationrate 在大肠杆菌感受态制备和转化过程中，ca“使得 中，ca“是感受态建立和转化的必要条件 。Ca“的 细菌细胞膜发生了一系列变化 ，从而极大增加了外源 作用，就是与细菌细胞膜上的多聚无机磷酸和多聚羟 质粒进入细胞内部的机率。处于这样一种状态的细菌 基丁酸化合物形成复合物 ，并破坏细菌细胞膜上的 细胞 ，我们就称之为 “感受态”细胞…。质粒转化大肠 脂质阵列 ，从而方便外源 DNA的渗入 ～ 。 杆菌是基因工程研究中常用的技术。如载体构建， CaC1，法制备大肠杆菌感受态细胞，操作简便 ，同 DNA片段测序等 ，都需要大量制备和使用大肠杆菌感