野大麦CIPK基因的亚细胞定位.pdfVIP

辽宁农业科学 2011(4)：I一5 LiaoningAgriculturalSciences 文章编号 ：1002—1728(2011)O4—0001—05 野大麦 CIPK基因的亚细胞定位 李率帅 ，阚国仕 ，魏建华 ，李瑞芬 (1．沈阳农业大学生物科学技术学院，辽宁 沈阳 110866； 2．北京市农林科学院北京农业生物技术研究中 心，北京 100097) 摘要：为明确野大麦 CIPK基因在植物亚细胞水平上的定位情况，以已知细胞质膜定位的拟南芥 AtCBL1基因 和液泡膜定位的AtCBL3基因作为参照，构建了这两个基因分别与红色荧光蛋 白基因(RFP)融合的植物表达 载体(参照载体)，以及野大麦 CIPK基 因与绿色荧光蛋 白基 因(GFP)融合 的植物表达载体 (目标载体)，利用 基因枪转化法将参照载体和 目标载体共转化洋葱上表皮细胞 ，瞬时表达后利用激光共聚焦显微镜进行共定 位分析 。结果表 明，该基因主要定位于细胞膜和细胞核，为进一步深入分析该基 因的功能提供 了重要依据 。 关键词 ：野大麦 CIPK基 因；基 因枪共转化 ；亚细胞定位 中图分类号 ：Q786 文献标识码 ：A CIPK(CBL—interactingproteinkinase，CIPK) CIPK可以组合成250种信号通路，为充分应对各 目前发现仅存在于植物 中，属于具有丝氨酸一苏 种环境胁迫、病虫害、机械损伤、植物激素刺激及 氨酸激酶活性 的蛋 白激酶家族 ¨ ，与钙调磷酸 生长发育需求，提供 了全方位解密 ca“信号、激 酶 B蛋 白(CalcineurinB-Likeprotein，简称 CBL) 活下游 目标基因以满足植株生长的CBL-CIPK信 相互作用构成植物逆境信号传导网络 。该蛋 号系统 。前期研究中运用 eDNA．AFLP技术对 白激酶家族在 N端含有一个激酶催化域 ，而在 c 野大麦在盐处理和对照条件下的根组织进行 了差 端含有一个高度保守的调节域。由于 CIPK家族 异表达分析。对获得 的差异条带 的测序结果在 N端结构与其它激酶相似 ，CIPKs被认为是植物 NCBI进行 BLAST分析 ，结果表明其 中一条差异 SNF1一类似激酶 (SNF1一relatedkinase，SnRK)之 条带序列与拟南芥、水稻等植物中丝氨酸／苏氨酸 中的SnRK3亚族 。 目前鉴定出拟南芥基因组 蛋白激酶 (serine／threonineproteinkinase)、钙调 中CIPK基 因家族有 25个成员，水稻基 因组 中 磷酸酶 B相互作用的蛋 白激酶 CIPK、SOS2(Salt— CIPK基因家族有 30个成员 。分析这两个典型家 Overly-Sensitive2)等具有很高的同源性 ，推测其 族发现 ，CIPKs可分为具有 内含子和不具有 内含 在野大麦对植物逆境应答的信号转导中起重要作 子两大亚族 。通过转录表达和功能分析表 明， 用 ，利用 RACE技术获得其全长基因，即为野大麦 CIPK基因是否含有 内含子与其响应逆境胁迫没 CIPK基 因，GenBank的登录号为 EF538762。该 有明显关系 o。 基因可互补拟南芥突变体 sos2的敏盐表型，可能 CBL-CIPK途径在高等植物中普遍存在 ，CBL 与高盐、干旱胁迫应答有关系。为了进一步研究 家族成员和 CIPK家族成员的多种特定组合在植 野大麦 CIPK基 因在体 内的生化特征和调控机 物应答逆境胁迫过程中起重要作用 。在拟南芥基 制，首先对其在细胞内分布进行研究。为此，我们 因组中CBL基 因家族有 10个成员，CIPK基 因家 利用绿色荧光蛋 白(GFP)基 因为报告基 因 ， 族有 25个成员。理论上 ，10种 CBL与 25种 构建以35s为启动子的野大麦 CIPK基