时间分辨测量技术在荧光免疫检测中的应用.pdfVIP

维普资讯 时间分辨测量技术在荧光免疫检测中的应用 一 ／ 四Jl】材料与工艺研究 17。o) 夏海礼 范 勇 一 摘 要：介绍。时间分辨脉冲荧光测量原理 并探讨这样一种特异性荧光检测实用系统的设 计和建立方法 。 关键词： 莅墨蛀黄出 斯托克思位移 壤 橱 莹 “时间分辩荧光 免疫技术 是最近几年新发展起来 发射荧光波长处测量荧光 强度 ．可以获得教高的信号 的 -fl生物医学分析技术 ，其 目的就是为 了逐步或者 荧光与本底荧光的比值。这就是建立一种高灵敏荧光 部份取代传统的 放射免疫分析方法”。8o年代初 ，国 测定的基本原理 。 外 (主要是瑞典和英 国)开始建立以双功能锖络合物为 1 时间分辨脉冲荧光测量系统的t立与分析 荧光发射体的时间分辩脉冲荧光免疫分析技术 ．此种 根据 时间分辨脉冲荧光测量原理 ，我们建立 了这 技术被认为是克服荧光标记物缺点的出色方法 ，是一 样一种特异性荧光检测的实用系统装置见圉 i。 种有创造性的技术 ，并在促进生物 医学的进展中起了 重要作用 ． 荧光分析是 比放射性分析应用更早的方法 但一 般的荧光免疫分析法与放射免疫分析法相 比，因其灵 敏度较低 ．故限制了它的广 应用。其灵敏度较低的原 因．主要是非特异的荧光波长 (如血清发 出的荧光)与 常用的荧光体发出的荧光波长 (如 FITC发 出的荧光) 是根接近的，甚至是重叠的，另外它们的荧光衰减时间 又根接近 。这样待测的特异性荧光便与非特异荧光混 在一起 ，致使一般荧光免疫分析法本底较高 ，而灵敏度 下降。要发展荧光免疫分析技术 ，必须降低非特异荧光 本底并加强特异性荧光强度。 有些 稀土 元素 (镧 系元索)，如铕 (Eu)和铽 (Tb) 能与许多有机物配基形成具有荧光特性的络合物 ，经 圈1 时间分辨脉冲荧光 量系境原理框圈 过荧光加强试剂的处理 ，可以产生高强度的荧光，更重 它主要有氙灯闪光光谭 、光学系统 、光电转换测量 要的是所发出的荧光与通常用的荧光体所发出的荧光 系统和时间分辨系统 四部分组成 。 相 比，具有下述特点 ： 首先 由时钟脉冲发生器产生 10001-#~稳定的连续 I、具有宽的斯托克思位移 (stokesshift)．即发射 脉冲．通过 电子门控制闪光管齄发器，使它产生高压触 光的波长与激发光的波长有较大的差别 发脉冲击驱动闪光管进行连续的闪烁 ．闪光管产生的 2、发射光是窄带型荧光 。 光经透镜滤光器聚焦在样品盒上 ，“样 品 被散发而产 3、发射光的荧光寿命特别长，一般可达 Oi-1ms， 生出一定强度的荧光，此荧光被另一组透镜滤光器聚 而非特异性本底荧光的寿命仅 为几十十 毫散秒 ，二者 焦到光 电倍增管 的光阴教上 ，由它转换成相应 的电流 相差十分悬殊。 脉冲。该管的阳极 电藏脉冲经过高建宽带的前置放大 根据 Stokes位移 ，特别是稀土元索信号荧光与非 器放大后 ，给甄别器 ，通过 电子门，对瑗定时间内接 收 特异本底荧光寿命的悬殊差别 ，就可以利用。时间分辨 到的脉冲敦进行计数 。计数器 内的景计脉冲敦与样品 测量技术 ，采用脉冲式的激发光源 ，使稀 土元索产生 盎 内所产生的荧光数量成正 比，最后对计数器内的脉 荧光 根据发射荧光的长寿命 ，可硅激发后一个足够长 冲进行辖出显示和打印。 的延迟时间内(使非特异本底荧光都消失)．再在窄的 下面对各系统进行分析讨论 。 《电子技术应用)H995年第 6．期