胚胎脑片免疫荧光组织化学双重漂染技术在神经元发生研究中的应用.pdfVIP

第 2o卷第 1期 中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 志 V01．20．NO．1 2011年 2月 CHINESE JoURNAL 0FHIST0CHEM ISTRY AND CYT0CHEM ISTRY Feb．2O11 胚胎脑片免疫荧光组织化学双重漂染技术 在神经元发生研究中的应用 敖 然 吴美延 赵 慧 周 莉 陈爱军 (吉林大学 白求恩医学院组织学与胚胎学系，长春 130021) [摘要] 目的 为更客观地观察胚胎脑神经祖细胞 的增殖、分化和迁移 ，建立胚胎脑片免疫荧光组织化学双重漂染技 术 。方法 灌流 固定，取胚胎 14天(El4)大鼠脑 ，低熔点琼脂糖包埋 ，振动切片机连续冠状切片，免疫荧光组织化学双重漂 染，激光扫描共聚焦显微镜下观察 。结果 波形蛋 白(Vimentin)和 乙酰胆碱转移酶(CHAT)双阳性细胞呈黄色荧光 ，胞体位 于脑室区，长突起呈放射状 。ChAT 阳性细胞呈红色荧光 ，除胞体位于脑室区，长突起呈放射状伸展外，可见皮层板区也有阳 性细胞集聚。结论 此项技术可直接观察到胚胎脑神经祖细胞和成神经细胞 的完整形态 ，并通过免疫荧光组织化学方法鉴 定其表型，从而阐明相互之间的关系 。 [关键词) 胚胎脑片 ； 免疫荧光组织化学 ； 神经元发生 (中图分类号] R329 [文献标识码] A DOI：10．3870／zgzzhx．2011．02．018 Application ofimmunofluorescencedoublestainningtechnologyfor embryobrainslicestothestudyofneurogenesis AoRan，W uM eiyan，ZhaoHUi，ZhouLi ，ChenAiun (DepartmentofHistologyandEmbryology，NormenBethuneCollege 0fJilinUniversity，Changchun130021，China) [Abstract] 0bjectiveToestablishthedoubleimmunofluorescentstainingtechniquefortheembryon— icbrainslicestoobjectivelyobservetheproliferation，differentiationandmigrationofneuralprogenitor cellsinratembryobrains．M ethodsRatembryosof14days(E14)werefixedbyperfusion．Thebrains weretakenandembeddedinlow—meltingagarose。thensliced withavibratome。stainedbydoubleimmu— nofluorescenceandobservedbyusingconfocallaserscanningmicroscopy．ResultsVimentinandcholine acetvltransferase(ChAT)doublepositivecellsshowedyellow fluorescencetheirbodieslocatedintheven— triclezone(VZ)，andtheradia1longprocessesin thesubventriclezone(SVZ)．0nlyChAT positivecells withredfluorescencewerefoundin thecortexplateofdorsaltelencephalon．ConclusionThemorphology andidentityofneuralprogenitorcellsandneuroblastsareidentifiedbyusingthetechnique，andtheirrela— tionshipcanbeanalyzedbydoubleimmunofluorescentstainin