PCR技术在植物检疫性病害鉴定中的应用.pdfVIP

第29卷 第 1期 西 南 林 学 院 学 报 V01．29 No．1 2009年 2月 JOURNAL OFSOUTHWESTFORESTRY UNIVERSITY Feb．20o9 PCR技术在植物检疫性病害鉴定中的应用 何末军，周国英，李 河 (中南林业科技大学 资源与环境学院，湖南 长沙410004) 摘要：简述了传统PCR、实时定量 PCR以及多重 PCR技术的基本原理及在植物检疫中的应用，分 析 了目前PCR技术存在的问题和应用前景。 关键词：检疫性病害；PCR；实时荧光定量 PCR；多重PCR 中图分类号：Q781 文献标识码 ：A 文章编号：1003-7179(2009)O1一oo89—05 随着现代生物技术，特别是分子生物技术的发 定是最困难的。但分子生物学的方法将病毒检测灵 展，植物检验检疫技术也有 了长足的进步，为我国的 敏度由血清学的ng水平提高到了pg级，用特异引 病虫害检测作出了巨大贡献。但植物检疫技术与横 物的PCR测定方法则更加灵敏。20世纪末以来，许 向的相关领域如人类医学诊断、动物医学诊断以及 多发达国家开始采用 PCR技术检测果树病毒，取得 食品微生物检测等相比，在总体水平上还存在着较 了很好的效果L4-5j。烟草环斑病毒 (TRSV)是我国 大的差距。在检疫性有害生物的诊断技术上提高检 公布的二类进境检疫有害生物 。1992年，Rob— 测的准确性、灵敏度和缩短检验时间、简化检测程序 inson等报道了用PCR的方法检测TRSV的研究，相 是植物检疫工作面临的重要课题。随着 PCR技术 宁等也报道了用RT—PCR检测 TRSV提取液中的 的日趋成熟和广泛应用，为检疫性有害生物的检测 病毒RNA灵敏度达400Pg，并可以直接从受侵染的 提供了很好的平台。本文通过阐述传统 PCR技术 叶片汁液中检出TRSV j。孔宝华等 对感病和健 及改进PCR技术在植物检疫性病害检测中的应用， 康组织总RNA进行 RT—PCR，PCR产物克隆作为 来说明目前检验检疫技术在分子水平上的发展情 RT—PCR反应的阳性对照，解决了检疫对象不能扩 况。 散的问题，从而建立了RT—PCR快速检测方法。 1．2 植物病原细菌检测 1 传统PCR技术在植物检疫性病害检测中 植物病原细菌的检测在我国植物检疫中有着重 的应用 要意义，目前 已对多种植物病原细菌成功利用了 PCR(polymerasechainreaction)技术郎聚合酶 PCR检测技术，包括一些重要植物检疫性病原细 链式反应技术，是一种在体外快速扩增特定基因或 菌。梨火疫病菌(Erwiniaamylovora)是我国一类检 DNA序列的方法。该技术 自从 Mullis等 |l在 1985 疫性有害生物，寄主范围广，主要危害经济植物苹 年创立以来 ，PCR方法已成为分子生物学及其相关 果、梨、山楂等，是一种毁灭性病害 J，谢云陆¨。应 领域的经典试验方法。此法灵敏、准确、方便、快速， 用 PCR技术准确、快速地检测出梨火疫菌潜伏侵染 可在短时间内扩增出数百万个特异 DNA序列的拷 的样品，检出样品中梨火疫菌的最低带菌量为5O个 贝。随着植物检疫技术的发展，PCR技术在植物检 细菌，未发现它与其他植病细菌有交叉反应，从 疫中的应用显示了广泛前景