不同缺血时段大鼠心肌组织中Nanog的表达变化及意义.pdfVIP

山东医药2011年第 51卷第26期 不同缺血时段大 鼠心肌组织 中Nanog的 表达变化及意义 吕风华 ，高建芝 。郭志坤。 (1新乡医学院第一附属医院，河南卫辉453100；2新乡医学院基础医学院； 3新乡医学院组织再生重点实验室 ) 摘要：目的 观察不同缺血时段大鼠心肌组织中Nanog的表达变化，并探讨其意义。方法 健康雄性sD大鼠 30只，随机分为假手术组(正常组)和Q1、Q2、Q3、Q4组 ，每组6只，后四组分别在心肌缺血2、6、12、24h取心肌组 织，采用 RT—PCR和Westernblot方法观察各组大鼠心肌组织中NanogmRNA和蛋白表达变化。结果 正常组和 Q1、Q4组心肌组织中NanogmRNA和蛋白表达最低 ，Q2、Q3组表达最高(P均 0．05)。结论 缺血 6～12h大鼠 心肌组织 中NanogmRNA和蛋白表达最高；Nanog可能在缺血后的心肌重构过程中发挥作用。 关键词：Nanog；核转录因子 ；心肌缺血；大鼠 中图分类号 ：Q95—3；R541 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2011)264)041-02 心肌缺血可导致心肌细胞缺氧，引起某些核转 常组心肌组织，Ql、Q2、Q3、Q4组分别于心肌缺血 录因子 的激 活，影 响干细胞分化 。 目前研究发 2、6、12、24h时取心肌组织，采用 RT—PCR法检测。 现 J，作为一种调节干细胞 自我更新的核转录因子 先提取组织中的总RNA，逆转录合成cDNA，半定量 Nanog在心肌缺血 的发病机制中的起重要作用。 RT—PCR扩增 Nanog、B—actincDNA片断。Nanog上 Nanog是一种存在于哺乳动物多潜能细胞和发育中 下游 引物序列分别 为 5一ATGCCTGTGArlq~GT— 的胚胎细胞中的同源结构域蛋 白，它不仅对胚胎细 GGGCC一3、5-GCCAGTYGTITIqCTGCCAC-3，p-ac— 胞的形成特别重要，而且对体细胞多潜能表达也起 tin’上下游引物序列分别为5一TCTACAATGAGCT— 调节作用_2J。2009年8月～2010年 3月，我们采用 GCGTGTG-3 、 5一GCTCAGGArCI’rCATGAGGT一3 。 RT—PCR和Westernblot法观察急性心肌缺血损伤 PCR反应条件：95℃预变性3min，94oC变性 1min， 大 鼠心肌组织中NanogmRNA和蛋 白表达变化，并 58℃退火 1min，72~C延伸 1min，共 35个循环，最 探讨其意义。 后 72℃延伸 5min。予以1．2％琼脂糖凝胶 电泳， 1 材料与方法 电泳结果拍照后用图像分析灰度扫描，进行半定量 1．1 实验动物分组及处理 选用健康 SD雄性大 分析。以Nanog与 B—actinPCR产物条带灰度值比 鼠30只(河南省实验动物中心提供)，体质量 180～ 值为NanogmRNA相对表达量。 220g。随机分为假手术组 (正常组)和Q1、Q2、Q3、 1．3．2 各组心肌组织中Nanog蛋 白检测 各组心 Q4组，各6只。后四组采用冠状动脉前降支结扎法 肌组织提取同1．3．1。所有标本 一78℃保存，采用 建立心肌缺血模型 J，以结扎后心前壁颜色变暗和 Westernblot法检测各组心肌组织 中Nanog蛋 白。 sT段明显抬高0．15mV确定建模成功。正常组除 以B—actin为 内参照。将蛋 白印迹显影图像扫描， 不结扎冠状动脉前降支外，余相同。 用 ImageJ图像分析软件进行半定量分析，以Nanog 1．2 主要试剂 RT-PCR试剂盒，Nanog兔抗 鼠多 蛋白灰度值与内参照 B—actin灰度值 比值为Nanog 克隆抗体，辣根酶标记山羊抗兔 IgG，PVDF膜 (孔径 蛋 白相对灰度值(灰度值与蛋 白表达量成反比)。