不锈钢微滤膜在5′-核苷酸生产过程中的应用.pdfVIP

亿 与 生 物 互程 2o09．voI．26№．3 开发应用国 Chemistry BIoengineering 不锈钢微滤膜在 5一核苷酸生产过程中的应用 陈 琦，吕 浩 ，张业勇 (南京工业大学制药与生命科学学院 材料化学工程国家重点实验室，江苏 南京 210O09) 摘 要 ：采用不锈钢微滤膜 ，对酶解 RNA制备 5一核苷酸 中杂蛋 白的分离工艺进行 了研 究。考察 了压力、温度对膜 渗透通量、杂蛋 白截 留率 以及透过液 中杂蛋 白含量等 的影响，确定最佳工艺操作条件为 ：压力3．8kg ·cm_ 、温度 2O℃， 此时杂蛋 白截 留率达到 66．7 、膜透过液 中杂蛋 白含量约为 O．1mg·mL～。研究表明，滤饼层模型能较好地解释不锈 钢膜的膜污染问题 ，通过考察膜渗透通量的恢复率 ，确定了最佳膜清洗方案，整个清洗过程只需要 11Omin，操作简捷 ，膜 渗透通量能完全恢复 。 关键词 ：微 滤膜 ；5一核苷酸 ；污染 ；再 生 中图分类号 ：TQO28．8 文献标识码 ：A 文章编号：1672—5425(2O09)O3一Oo53一O5 核苷酸是一类极为重要 的生化物质，几乎在所有 到了最佳工艺操作条件 ；通过考察不同清洗方案对膜 细胞的结构、代谢、能量和功能调节等方面起着重要作 渗透通量恢复率的影响，确定了最佳膜清洗方案 。 用[1]。核苷酸类物质及其衍生物被广泛地用于农业、 l 实验 食品制造、医药生产等领域 [2]。近年来 ，国内外市场对 其需求量和品质要求不断提高口]。 1．1 试剂及仪器 核苷酸的生产方法主要有化学合成法和生物技术 标准品：单磷酸胞苷 (CMP)、单磷酸尿苷 (UMP)、 法(酶解法、微生物发酵法以及生物催化法)L4]。化学 单磷酸鸟苷 (GMP)、单磷酸腺苷 (AMP)(纯度 合成法的路线长 、立体选择性差 ，所用试剂昂贵并有一 98 )，Sigma公司；RNA酶解液 ，国家生化工程技术 定毒性 ，生产成本较高 ；目前生物技术法是我国核苷酸 研究 中心 ；浓硝酸，化学纯；氢氧化钠 、EDTA一4Na、柠 工业生产采用 的主要技术，但 由于工艺 中产生大量色 檬酸、磷酸二氢铵 ，分析纯；甲醇 ，色谱纯 ；牛血清 白蛋 素、杂蛋 白类有机物等物质 ，普通抽滤难以去除 ，在后 白(BSA)，生化试剂 ，上海化学试剂公司；考 马斯亮蓝 续分离工艺中易导致离子交换吸附树脂被污染 、难 于 G25O，上海新兴化工试剂研究所；超纯水 ，自制 。 洗脱 、吸附分离能力下降、生产周期长 ，并影响产 品的 HF—A一 01型0．17m。不锈钢微滤膜 中试设备 ， 纯度、色泽、晶体质量等[5]。 凯能高科技工程 (上海)有 限公 司；P680／ASI一1O0／ 文献报道膜分离技术可以有效地去除杂蛋白等物 UDV17OU型高效液相色谱仪 ，美 国戴安公司；Lamb— 质[6]，其中不锈钢微滤膜作为一种新型的无机复合分 da25型紫外分光光度计 ，美国PerkinElmer公司。 离膜 ，具有传统膜无法比拟的机械强度和化学稳定性、 l-2 分析方法 更好 的耐温耐压性能、易清洗 、使用寿命长等优点[7]， 1．2．1 5一核苷酸的分析[11] 在工业生产 各领域 中得 到广泛 的应 用和普遍 关 色谱条件 ：Lichrospher一5一Cl8色谱柱 (5 m，250 注 。～ 。 mm×4．6mm)；流动相 ：2Ommol·L (NH4)H2PO4 为了减轻 5，_核苷酸后续分离纯化工艺的强度 ，作 溶液 (用超纯水配制)、甲醇 ，