花生fw2.2基因的克隆及遗传转化.pdfVIP

核 农 学 报 2011，25(6)：1123～1128 1I23 JournalofNuclearAgriculturalSciences 文章编号：1000—8551(2011)06—1123~6 花生 2．2基因的克隆及遗传转化 刘 强 王晶珊 乔利仙 赵春梅 隋炯明 (青岛农业大学生命科学学院，青岛市主要农作物创新与应用重点实验室，山东 青岛 266109) 摘 要．．fw2．2基因是影响番茄果重的一个重要数量性状基 因，在心皮的细胞分裂中起 负调控作用。本 研究以番茄 2．2基 因的序列为探针 ，从花生 EST数据库中筛选 同源序列。根据花生的EST拼接序列 设计引物对花生进行扩增 ，目标产物测序后 ，将推测的氨基酸序列与其他植物． 2．2基 因编码 的氨基酸 序列进行比对，同源性为34．78％～66．85％。半定量 RT—PCR结果表明，该基因在野生种和栽培种中的 表达存在差异。将 2．2基 因连接到植物表达载体 ，通过农杆菌介 导法转化花生品种花育23号 ，获得 了 12个 PCR 阳性 的独立转化子 。 关键词：花生；fw2．2基因；克隆；转化 CLONING AND GENETIC TRANSFORM ATION OF．tw2．2GENEINPEANUT LIUQiang WANGJing—shan QIAOLix··ian ZHAOChunm··ei SUIJiong—uring (QingdaoKeyLabofGermplasmInnovationandApplicationofMajorCrops，CollegeofLfieScience， QingdaoAgriculturalUniversity，Qingdao，Shandong 266109) Abstract：fw2．2geneisanimportantquantativetraitlocus(QTL)affectingrfuitweightintomato，andcanreducecell divisionincarpelsasanegativeregulator．Inthisexperiment，fw2．2geneintomatowaspreparedasprobetoscreen homologoussequencefrom peanutESTdatabase．Then，accordingtothejointESTsequence，apairofprimerwas designedtoamplifiedthefw2．2geneofpeanut．Comparedwithotherplants，thesimilarityrangeofaminoacidsequence wasbetween34．78％ and66．85％ ．Expressiondifferencewasdetectedbetweenwildandcultivatedmaterialsbysemi— quantitativeRT—PCR．AftertransformationmediatedbyAgrobacterium tumefaciens，12independenttransformantsof peanutcultivarHuayu23wereidentificatedbyPCR amplification． Keywords：peanut；fw2．2gene；cloning；transformation 分子生物学的快速发展和高密度遗传图谱 的构建 等位基因能使果实增大 ，这个基因对番茄果重 的影响 使数量性状基因的克隆成为可能。目前 ，在植物 中已 占整个果重变异的30％，是番茄果重进化中的一个关 克隆了多个数量性状基因，它们有些编码转录因子 ，有 键性基因 。 些参与新陈