CD2相关蛋白在足细胞分化中的作用.pdfVIP

维普资讯 ~ ActaPhysiologicaSinica，February25，2008，60(1)：135．142 http：llwww．actaps．com ．ca CD2相关蛋白在足细胞分化中的作用 姜华军 ·，常莹2，朱忠华 ·，刘建社 ·，邓安国 ·，张春 ，· 华中科技大学同济医学院t附属协和医院肾内科，武汉 430022；z附属同济医院肝病研究所，武汉 430030 摘 要：本文旨在研究肾脏足细胞的分化特点及CD2相关蛋白(CD2．associatedprotein，CD2AP)在足细胞分化过程中的作用。 用RPMI1640培养基在 33。C许可条件下培养永生化小鼠足细胞系(未分化组)，转染针对CD2AP的小分子干扰RNA(small interferingRNA，siRNA)后置于37。C非许可条件下培养(转染组)，并将非许可条件下未转染组作为对照组 。用MTT法检 测足细胞的生长速度；用RT．PCR方法检测CD2AP、WT1、synaptopodin和nephrinmRNA表达；用Westernblot检测 CD2AP、WT1和nephrin蛋白表达；用免疫荧光结合激光共聚焦方法检测CD2AP、nephrin、F．actin和tubulin在分化及 未分化足细胞中的分布及其共定位情况。结果显示，CD2AP、wTl和nephrin在分化及未分化足细胞中均可稳定表达， 而 synaptopodin仅表达于已分化足细胞，在未分化足细胞无表达。在足细胞分化过程中，CD2AP和nephrin的表达上调(P 0．05)；CD2AP、tubulin和F．actin在细胞内的分布发生改变，CD2AP与nephrin及F．actin在未分化足细胞中存在共定位关 系。转染特异性 siRNA下调CD2AP表达，细胞生长速度明显减慢，synaptopodinmRNA表达下调(P0．05)，细胞分化 迟滞。结果表明，足细胞分化过程中伴随细胞骨架的重新分布和细胞形态的改变 ；CD2AP可能作为足细胞裂孔隔膜分子 与细胞骨架的连接蛋 白，在足细胞分化过程 中发挥重要作用 。 关键词：CD2相关蛋白：足细胞；nephrin；synaptopodin；wT1 中图分类号：R329．2；R334．1 RoleofCD2·associatedproteininpodocytedifferentiation JIANGHua·Jun。，CHANGYing，ZHUZhong·Hua。，L1U Jian·She。，DENGAn·Guo。，ZHANGChun。’‘ DepartmentofNephrology,UnionHospital,TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityoJ’ScienceandTechnology,Wuhan430022， China；。InstituteofLiverDisease，Tong]iHospital,Tong]iMedicalCollege，HuazhongUniversiytofScienceandTechnology,Wuhan 430030,China Abstract：TostudythecellularchangesandthepotentialroleofCD2一associatedprotein(CD2AP)inpodocytedifferentiation， conditionallyimmortalizedmurinepodocytecelllinewasculturedinRPMIl640medium underpermissiveconditionat33oC．After transfectionwithCD2APsmallinterferingRNA (siRNA)htecellswereshiftedtonon-permissiveconditionat37oC．Simultaneously， untransfectedcellsweretakenasdifferentiationcontro1．Thepodoc yteproliferationratewasdeterminedbvMTrrmethod．The expressionsofCD2AP,W Tl，synaptopodinandnephrinmRNAswereexaminedbyRT．PCR．C