小鼠血浆去除白蛋白前后的双向凝胶电泳分析.pdfVIP

维普资讯 · 实 验 研 究 · 小鼠血浆去除 白蛋白前后的双向凝胶 电泳分析 王建东 任艳 夏季 宋旭华 刘斯奇 李荣 徐迎新 【摘要】 目的 探索应用DEAE—CibacronBlue3GA去除小 鼠血浆 白蛋白的条件。方法 在 DEAE-CibacronB1ue3GA与小鼠血浆结合的不同时间点取样，SDS及蛋 白质定量检测去除 白蛋白的效果，对最佳结合时间点所取的血浆行双向凝胶电泳 ；软件分析去除白蛋白前后双向电泳 显示的蛋白质斑点变化。结果 DEAE—CibacronBlue3GA与小鼠血浆结合 40min时，小鼠血浆中 8O％的白蛋 白被去除，双向电泳显示的蛋 白质点由处理前的(211±19)个增加到 (392±11)个；其中 蛋白表达量增加3、5、10、20倍的斑点数 目分别为 13、6、6、5。结论 DEAE—CibacronBlue3GA可以 有效去除小鼠血浆中的白蛋白，该方法可以应用于实验外科领域小鼠血浆蛋白质组的研究。 【关键词】 白蛋白； 小鼠； 血浆蛋白质组； 双向凝胶电泳 Anapproachtoremovealbum infortheproteomicanalysisOfbiomarkersinmouseplasma WANG Jian—dong。，REN Yan，X Ji，etal， InstituteofGeneralSurgery，ChinesePLAGeneralHospital， Beijing100853，China A【bstract】 0bjective Toreducetheinterferencefromtheplasmaabundantproteinsintwo-di— mensionalgelelectrophoresis(2-DE)，asamplepreparationtoremovealbuminandtoenrichlowabundant proteinsinplasmaWas developed Methods PlasmasamplesofmouseweretreatedwithDEAE—Cibacron Blue3GAandthenSUbjectedto2-DE．Proteinspotswerevisualizedbysilverstainingandfurtherana一 1、rzedbvPhoretix2D v2003．02 Results Comparisonofthe2DE images forthemouseplasmatreated withandwithouttheaffinityresinrevealedthatalbuminWas removedalmost80％ andthestainedspots weresignificantlyincreasedfrom 211±19 to392± 11duetothetreatmentDEAE—CibacronBlue3GA treatmentfor30minresultedinenhancedvisualizationof13proteinspotsby3-fold，6by5一f01d，6by1O— foldand5by20一f0ldConclusion Theplasmapreparationusingtheaffinityresinisanefficientapproach toremovealbuminandresultsinhighqualityof2DE images fortheanalysisofdifferential proteom icsin plasma K【eywords】 Albumin； Mouse； Plasmaproteome； 2一DE 双 向电泳技术是一种应用广泛的蛋 白质分离技 凝，离心2000g，10rain，吸取上层血浆，分装，一80℃ 术。但血浆中白蛋白的含量高达 55％，不但影响了双 储存 。 向电泳时其他蛋 白质的上样量，使得难 以检测低丰度 2．CibacronBlueresin(CB—resin，Sigm