恶性疟原虫海南株FEN-1基因的克隆及序列分析.pdfVIP

维普资讯 中国寄生虫病 防治杂志 2005年 2月 第 18卷第 1期 ·16 · ChinJ ParasitDisCon February2005，Vo1．18．No．1 论著 · 恶性疟原虫海南株 FEN一1基因的克隆及序列分析 王萍，吴娴波，李明 (南方医科大学热带病研究所 ，广东广州 510515) 【摘要】 目的 克隆并测定恶性疟原虫海南株 (FCC1／HN)侧翼核酸 内切酶一1(FEN一1)基因序列，比较 FCC1／HN株与 国外分离株 FEN一1基因序列的差异。 方法 根据 FEN一1基因已知序列设计合成 1对引物，应用 PCR技术从 FCC1／ HN株基因组 DNA 中扩增出FEN一1基因，构建重组质粒PMD18-T—FEN一1。阳性克隆的重组质粒经酶切鉴定后进行测 序 。应用 DNAMAN分析软件进行不 同分离株 FEN一1基 因序列的同源性 比较 。 结果 PCR扩增得到特异的FCC1／ HN株 FEN一1基因序列 ，基因全长 1947bp，A+T含量为 56 ，G+C含量为44 。酶切鉴定获得了正确的PMD18-T- FEN一1重组质粒 。测序表明，恶性疟原虫 FCC1／HN株与 国外 Gambia株和 3D7株 的FEN一1基 因序列有较高的同源性 。 结论 成功克隆恶性疟原虫 FCC1／HN株 FEN一1基 因。序列测定及 同源性分析表明，恶性疟原虫 FCC1／HN株与 国外 已报道各株的 FEN一1基因序列有高度同源性。 【关键词】 疟原虫，恶性；侧翼核酸 内切酶一1；基 因序列 【中图分类号】 R382．31 【文献标识码】 A 【文章编号】 1001—6627(2005)01—0016—03 DNA复制和修复是维持基 因组稳定的必要 的生 GAGTATA一3。5和 3端分别引入 BamH I和 Hind 理活动。1997年美国国立环境卫生科学研究所 (NIE— Ⅲ酶切位点。由上海博亚公司合成。 HS)提出了环境基因组计划，DNA修复基因被列为第 1．3 试剂 核酸 电泳分子质量标准购 自TaKaRa生 [】] 一 ， 可见 DNA修复之重要性。侧翼核酸 内切酶一1 物技术 公 司；BamH I和 HindIlI限 制性 内切 酶、 (Flapendonuclease，FEN一1)是参与生物体核酸复制 T4DNA连接酶为 NEW ENGIANDBioLas公 司产 和修复的重要 的酶之一 ，尤其是在滞后链合成过程 中 品；TaqDNA聚合酶及 dNTP购 自上海博亚公司。 的切补修 复。目前 ，国外对 鼠、人、爪蟾及植物等 的 2 方法 FEN一1已有一些研 究_2 ]。但对于疟原虫的 FEN一1 2．1 恶性疟原 虫基 因组 DNA提 取 恶性疟原虫基 的研究还未见有文章报道 ，而对寄生虫细胞和分子生 因组 DNA提取按文献[9，10]方法进行。先用 STE 物学的深入了解有助于产生有效防治寄生虫病的新靶 缓冲液洗虫 3次，弃上清 ，加 10倍体积溶虫缓冲液 (含 点和策略 j。 2 SDS、1mg／ml蛋 白酶 K 的 STE)，55℃孵育 2h。 作者等对本室构建 的恶性疟原虫海南株 (FCC1／ 用 25：24：1的酚 ：氯仿 ：异戊醇抽提反应液 ，乙醇 HN)cDNA表达文库 的研究显示 ，其 FMPf01cDNA 沉淀 DNA，溶于无菌水 中。 的表达产物有较强 的抗原性 [8]，该 cDNA 即为恶性疟