葛根素对Rho激酶在大鼠心肌缺血-再灌注损伤中作用的影响.pdfVIP

· 858 · HeraldofMedicineVo1．30No．7July2011 葛根素对 Rho激酶 在大鼠心肌缺血一再灌注损伤 中作用的影响丰 吴利云 ，罗冬娇 ，童夏生。，阮正英。，王恩智 ，陈豪 (1．浙江省台州市中西医结合医院泽国院区，317523；2．杭州师范大学钱江学院，3100l2) [摘 要] 目的 观察Rho激酶在大鼠心肌细胞缺血一再灌注损伤细胞凋亡中的作用，及葛根素对缺血一再灌注损伤 中Rho激酶、细胞凋亡的影响。方法 45只sD大鼠随机平均分为3组：空白对照组、模型对照组(缺血一再灌注+0．9％氯化 钠溶液)和药物治疗组(缺血一再灌注+葛根素注射液)，每组 15只。Westernblot法检测肌球蛋白磷酸酶 目标亚单位 1 (MYF]I)磷酸化水平，作为Rho激酶功能活化的标志，流式细胞仪检测细胞凋亡百分率 结果 再灌注后 MYPTI的磷酸 化水平显著性增加，模型对照组为空白对照组的6．26倍 (P0．01)，药物治疗组较模型对照组减少27．9％(P0．05)。药物 治疗组心肌细胞的凋亡率较模型对照组呈下降趋势(P0．01)。结论 Rho激酶在缺血一再灌注心肌细胞 中有促 MYPT1磷 酸化水平上调作用，葛根素可减少缺血一再灌注心肌细胞凋亡的发生，从而发挥 良好的心肌保护作用 [关键词] 葛根素；缺血一再灌注损伤；Rho激酶；细胞凋亡 [中图分类号] R965 [文献标识码] A [文章编号] 1004—0781(2011)07—0858—03 缺血一再灌注损伤 (ischemia—repedusioninjury， 1．3 方 法 IRI)是指细胞因缺血发生可逆性、可存活的损伤，在缺 1．3．1 动物分组与给药 45只SD大 鼠随机分为 3 血纠正后这种损伤反而加重并引起细胞死亡或进一步 组：空 白对照组、模型对照组和药物治疗组，每组 l5 的功能障碍。细胞凋亡是心肌 IRI发生的重要机制之 只。术前 12h禁食不禁水。空 白对照组旷置左冠状 一 ， 是心肌受损、心力衰竭发展的重要因素。体外实验 动脉前降支 30min；而模型对照组和药物治疗组用血 证明腺病毒过度表达激活的RhoA作用于Rho激酶可 管夹夹闭左冠状动脉前降支30min，再灌注2h 空白 导致心肌细胞肥大，继而促发细胞凋亡 ¨j。笔者研究 对照组和模型对照组于术前 30111in分别经股静脉输 心肌 IRI大鼠模型，探讨Rho激酶在缺血．再灌注心肌 注0．9％氯化钠溶液 2mL ·(100g) ，而药物治疗组 细胞中是否有促凋亡作用，以及葛根素 (Puerarin)对 于术前30min经股静脉注射葛根素注射液0．05g。 Rho激酶水平 的影响，从而为心肌 IRI的治疗及 中药 术毕处死，取心尖以上缺血梗死区横切 3mm厚心肌 在临床使用提供理论依据。 组织 ，去离子水漂洗3次 ，用现配多聚甲醛液固定。 1 材料与方法 1．3．2 动物模型的制作 采用改进方法造模再灌注， 1．1 实验动物 雄性 SD大鼠45只，购于温州医学院 造模方法参照文献 [2]：大鼠用戊巴比妥钠麻醉后，气管 实验动物中心，动物证号：SCXR(浙)2005-0019，清洁级， 切开接动物呼吸机，呼吸频率 60次 ·rain ，潮气鞋 体质量250～350g，7～l0周龄。饲养于恒温、净化、通 2mL ·(100g)一。用止血钳游离大鼠左侧的胸大肌，暴 风动物房，自由进食和饮水，室温保持(25+2)c(=。 露左第2，3，4肋，分别在左第 2，3，4肋间隙距离胸骨左 1．2 试剂 葛根素注射液 (浙江康恩贝制药股份有 缘约0．5cIn处进针穿线，每个肋间隙同一进针点穿两 限公司产品，批号：060102)，细胞凋亡检测试剂盒和 根0号手术线