丁基苯酞对慢性脑缺血大鼠海马Chat蛋白表达的影响.pdfVIP

维普资讯 山东医药2008年第48卷第4期 丁基苯酞对慢性脑缺血大 鼠海马 Chat 蛋 白表达的影响 沈瑞乐 ，王兴萍 ，滕军放 ，卢 宏 (1河南科技大学第一附属医院，河南洛阳471003；2郑州大学第一附属医院) [摘要] 制作老龄大鼠慢性脑缺血模型，并分别应用高剂量、低剂量丁基苯酞(NBP)进行治疗。应用斑点免 疫测定法检测对照组、单纯缺血组、缺血低剂量治疗组、缺血高剂量治疗组和预防组大鼠脑海马组织中胆碱乙酰基 转移酶(Chat)蛋白的表达。结果单纯缺血组海马Chat蛋白表达水平最低，缺血高剂量治疗组蛋白表达明显高于 缺血低剂量治疗组和预防组(P均0．05)。认为慢性脑缺血后大鼠海马Chat蛋白表达水平下降，NBP可使 Chat 蛋白表达水平提高。 [关键词] 脑缺血 ，慢性；大鼠；胆碱乙酰基转移酶 ；丁基苯酞 [中图分类号] R743 [文献标识码] B [文章编号] 1002-266X(2008)04-0029-02 慢性脑缺血是血管性痴呆的重要发病基础。血 分放人超低温冰箱储存备用。 管性痴呆认知损害的机制涉及胆碱能递质等多方 1．2．3 DIBA方法 采用单去污裂解法提取组织总 面，而胆碱乙酰基转移酶 (Chat)是决定乙酰胆碱 蛋 白，PBS稀释抗原，剪取中枢神经细胞 (NC)膜 5 (Ach)的关键因素，是研究胆碱能神经元的特殊标 cm×8cm，按顺序依次点样 5 l，37a=【烘干，再依次 志。2005年 10月一2007年2月，我们采用斑点免 点样5 l，37a=【烘干。配制 TBST缓冲液、封闭液， 疫测定法 (DIBA)检测慢性脑缺血老龄大 鼠海马 封闭NC膜，室温反应 1h，摇匀，TBS缓冲液洗3次。 Chat蛋白水平的变化，并应用丁基苯酞 (NBP)进行 加入TBST缓冲液稀释的一抗，室温摇匀，TBS缓冲 干预，旨在探讨NBP治疗慢性脑缺血的机制。 液洗3次。加入 TBST缓冲液稀释的二抗，室温摇 1 材料与方法 匀。用TBS缓冲液洗3次，DAB显色，凝胶图像处理 1．1 实验动物与分组 健康wistar大鼠150只，12 系统分析各组斑点的灰度值。 — 14月龄，体质量400—500g，由郑州大学实验动物 1．2．4 统计学方法 数据 以 ±s表示，采用 SPSS 中心提供。将大 鼠随机分成 A组 (对照组)、B组 10．0软件进行数据处理，多组间比较采用单因素方 (单纯缺血组)、C组 (缺血低剂量治疗组)、D组 (缺 差分析，并进行两两 比较，P≤0．05为有统计学差 血高剂量治疗组)、E组(预防组)共 5组。 异 。 1．2 方法 2 结果 1．2．1 脑缺血模型的制作与处理 B、c、D、E组采 2．1 大鼠一般情况 大鼠麻醉清醒后均出现不同 用永久性结扎双侧颈总动脉制作慢性脑缺血模型。 程度的精神萎靡，反应迟钝 ，自洁能力下降，进食减 A组除不结扎双侧颈总动脉外，其他处理同模型组。 少。术后 1dA组精神恢复，反应灵敏，进食增多；模 用花生油将NBP稀释至2ml，E组于造模前 1个月 型组运动减少、不能进食、反应迟钝，部分大鼠共济 给予NBP80mg／(kg ·d)，C、D组造模 2个月后分 失调，无明显肢体瘫痪。3—5d后造模大鼠精神、反 别给予 NBP60、120mg／(kg·d)，A、B组给予花生 应、进食逐渐恢复，1周后接近正常。模型组 120只 油2ml／d，各组均连续灌胃1个月。模型成功标准： 大鼠中，3个月内死亡36只；A组死亡4只。 大鼠在继续饲养过程中，行动活泼，正常饮食，眼部 2．2 DIBA结果 A、B、C、D、E组脑海马区Chat的 无分泌物，毛色光洁，体质量增加。排除3个月内死 免疫斑点灰度值分别为25．71±4．83、8