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第6卷第 1期 生 物 加 工 过 程 Jan．2008
2008年 1月 ChineseJournalofBioprocessEngineering · 17 ·
丁酸梭茵 1，3一丙二醇氧化还原酶基因dhaT
的克隆及在大肠杆菌中的表达
杨登峰 ，韦宇拓 ，黄 日波
(1．广西科学院 工业生物技术中心，南宁530003；
2．广西大学 生命科学与技术学院，南宁530005)
摘 要：以丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)基因组DNA为模板，利用PCR技术扩增得到 1，3一丙二醇氧化还原酶基
因dhaT。将它连接到pMD18．T载体上，得到重组质粒 pMD．dhaT，对此重组质粒进行序列测定，对其DNA序列分析
表明，dhaT基因全长为 1158bp。将 dhaT基因插入表达载体pSE-380中，构建成重组子pSE—dhaT，并在大肠杆菌
JM109中进行诱导表达。研究表明，以1，3．丙二醇为底物时，基因工程菌在 37℃下，以1．0mmo~LIPTG诱导 14
h，酶活力达到 16．28U／mL，比原始菌株提高5、6倍。
关键词：克隆；丁酸梭菌；表达；氧化还原酶；1，3一丙二醇
中图分类号：Q785 文献标识码：A 文章编号：1672—3678(2008)01—0017—04
Cloningandexpression of1，3-propanedioloxidoreductasegene
from Clostridium butyricum inEscherichiacoli
YANG Deng—feng ，WEIYu—tuo ，HUANG Ri—bo’
(1．IndustrialBio—technologyResearchCenter，GuangxiAcademyofSciences，Nanning530003，China；
2．CollegeofLifeScienceandTechnoloyg，GuangxiUniversity，Nanning530005，China)
Abstract：ThedhaTgeneencoding1，3-propanedioloxidoreductase(DhaT)wasamplifiedfromthege。
nomeofClostridium butyricum bypolymerasechainreactionandligatedintopMD 18一Ttoobtainrecombi—
nantplasmidpMD．dhaT，whichweresenttosequence．Itwasshownrfom DNA sequenceanalysisthat
theopenreadingframeofdhaTwas1158bp．ThegeneofdhaTwasinseaedintoexpressionvectorpSE一
380andtherecombinantplasmidpSE．dhaTwasconstructedandthen transofrmedintoE．colJM109．
TheresultsshowedthattheenzymaticactivityofDhaTincrudeextractsreachedupto16．28U／mLwhen
using1．3．propanediolassubstrateundertheinduced condition of1．0mmol／L IPTG at30 oC for14
hours．anditwasincreased5．6ofldcomparedwiththat
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