光谱法研究Cu^2＋与肌红蛋白的相互作用.pdfVIP

维普资讯 Vo1．29 高 等 学 校 化 学 学报 No．2 2008年2月 CHEMICALJOURNAL OFCHINESEUNIVERSITIES 258～263 光谱法研究 Cu2+与肌红蛋 白的相互作用 马 静 ，郑学仿 ，唐 乾 ，杨彦杰 ，孙 霞 ，高大彬 (1．大连大学生物工程学院，2、辽宁省生物有机化学重点实验室，大连 116622) 摘要 用紫外吸收光谱、荧光光谱 、同步荧光光谱及圆二色 (CD)谱研究了cu“与肌红蛋白(Mb)的相互作 用．结果发现，cu 使Mb的紫外吸收增强，峰位蓝移，说明cu“与Mb发生了较强的相互作用；Mb的特征 荧光峰猝灭 ，且随着温度升高猝灭常数 降低，表明Cu“对 Mb的荧光猝灭机制属于静态猝灭；计算了不 同温度下的结合常数和结合位点数；由vantHoff方程计算 出 △日和 △5分别为一11．60kJ／mol和33．77 J·(mol·K)～，得出二者之间的作用力主要为静电力；并依据FJ／rster非辐射能量转移理论确定了给体一受 体问的结合距离r=2、56rim．同步荧光光谱表明，cu“对Mb的构象产生影响，使色氨酸残基的疏水性下 降．CD光谱测得加入 cu“后，二级结构发生改变，使oL一螺旋含量降低． 关键词 肌红蛋白；紫外一可见光谱；荧光光谱 ；同步荧光光谱；圆二色谱 中图分类号 0657 文献标识码 A 文章编号 0251-0790(2008)02-0258-06 金属离子，尤其是金属微量元素在人体中的含量极少，却与人体的生理功能密切相关，在人体的 生理机能和新陈代谢中起着非常重要的作用 J．蛋白质是一种含多个配位基团的生物大分子，其生物 功能与其特定结构相关．金属离子能够通过与内源配体(氨基酸侧链基团)和外源配体 (如水分子、卟 啉环、有机小分子等)配位，结合到蛋白质分子中，这在某种程度上还影响蛋白质结构，进而影响其功 能的发挥．因此，研究金属离子与蛋白质的相互作用，有助于了解金属离子在体 内的代谢过程及对蛋 白质结构的作用，从而更进一步清晰地解释金属离子对蛋白生物学功能产生的影响，对于基础理论研 究和实际运用具有十分重要的意义． 肌红蛋 白(Mb)是哺乳动物细胞，尤其是肌细胞贮存和分配氧的蛋白质．在生物体 内起着储存氧 和促进氧在细胞中扩散的作用．肌红蛋 白由一条多肽链和一个血红素辅基构成，相对分子量为 17800， 含 153个氨基酸 ]．在研究蛋白结构和与其它分子的相互作用方面，由于其结构简单且具有重要的生 物活性而成为一种模型蛋 白．Pablo等 曾报道了肌红蛋 白与青霉素药物的相互作用，但有关肌红蛋 白与金属离子相互作用的研究很少有报道． 采用光谱法研究金属离子与蛋白质相互作用具有方便、快速 的特点．本文运用紫外吸收光谱、荧 光光谱、同步荧光光谱及圆二色谱研究了cu 与肌红蛋 白的相互作用，考察了cu 对Mb构象的影 响，探讨了相互作用的荧光猝灭机理，计算了结合常数、结合位点数及热力学常数，根据热力学常数 判定了作用力类型，并由Forster非辐射能量转移理论求出了两者的结合距离，研究了cu 与Mb的相 互作用，在一定程度上为研究金属离子与蛋白质相互作用提供了有价值的实验数据和理论依据． 1 实验部分 1．1 试剂与仪器 马心肌红蛋 白样品(美国Sigma公司)，使用时配制成5X10 和1X10。mol／L的储备液，并置于 冰箱中(4℃)保存；CuSO (分析纯)，配制成0．1mol／L的储备液；用Na：HPO ·12H：0和NaH：PO 。 2H：0(均为分析纯)配制成 Na：HPO一NaH：PO 缓冲溶液 (0．05mol／L，pH=7．40)，并置于冰箱 中 收稿Et期 ：2007-07-02． 基金项 目：国家 自然科学基金 (批准号、辽宁省优秀人才培养计划 (批准号：RC-04—10)和辽宁省生物有机化学重点实 验室 (大连大学)基金资助． 联系人简介：郑学仿，男，教授，主要从事生物无机化学研究．E—mail：dlxfzheng@163．con