烟草烟酰胺酶基因的克隆及序列分析.pdfVIP

生物技 术通报 · 研 究 报 告 · BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2011年 第 6期 烟草烟酰胺酶基 因的克隆及序列分析 蔡刘体 胡重怡 (贵州省烟草科学研究所，贵阳550081) 摘 要： 烟酰胺酶是烟草中烟碱合成途径中的关键酶之一。在植物中，通过烟酰胺酶的催化作用，烟酰胺转化成烟酸， 烟酸是合成烟碱的一个重要底物。从烤烟品种南江3号 (NicotianatobacumCV．Nanjiang-3)均一化全长cDNA文库中克隆获得 烟草烟酰胺酶基因cDNA全长序列(命名为T-nic1)，GenBank中的登录号为HQ448853，该基因全长为841bp。利用ORFfind— er和PmtParam软件分析显示，它包含一个完整的开放读码框，编码一个含有 162个氨基酸、等电点为4．94、分子量为 18．2kD 的小分子量蛋白。Blast搜索结果及进化分析结果表明，该基因编码的蛋白与毛果芍药、拟南芥中的烟酰胺酶序列具有较高的 同源性，其氨基酸序列一致性分别为7l％、67％。 关键词 ： 烤烟 烟酰胺酶 基 因 克隆 CloningandSequenceAnalysisofNictinamidase Genefrom Flue．curedTobacco CaiLiuti HuZhongyi (GuizhouTobaccoResearchInstitute，Guiyang550081) Abstract： Nieotinamidaseisoneofkeyenzymesinthepathwayofnicotinabiosynhtesisintobacco．Inplants，byhtecatalyzation ofnicotinamidase，thenicotinamidewasconvertedintonicotinatewhichisoneof importantsubstratesinhtebiosythesisofnicotina．From thefull—lengtheDNAlibraryoftheflue—curedtobaccocuhivarsNanjiang-3．htefLlⅡlengtheDNA sequenceoftobacconicotinamidasc gene(namedT-nic1)WasclonedanditssequenceWas analyzed．AnalysisbyhtesoftwareORFfindernadProtParamshowedthattheT- n／elincluded841bp，whichencodingaproteinof162aminoacids，anditsGenBankaccessionisHQ448853．TheresultsofBlastand phylogeneticanalysisshowedthatT-niclgenehadhomologywi山 htenicotinamidasegeneofsomehig【hplants．T-nicl—encodedprotein hadhighidentityw．ththenicotinamidaseproteinof ArabidopsisthalianaandPopulustrichocarpa，whichis71％ ，67％ ，respectively． KeyWOrds： Flue—curedtobacco Nicotinamidase Gene Clone 烟草中烟碱含量是烟草和卷烟质量控制的一项 基因的克隆及功能调节研究未见报道 ，本研究从烤 重要指标 ¨l2J。在高等植物 中，烟碱合成的直接底 烟南江 3号均一化全长 cDNA文库中克隆的烤烟烟 物是N．甲基吡咯啉和烟酸，其中烟酸的含量与烟酸 酰胺酶基因，为烟草烟碱合成途径的调控研究提供 单核苷酸、烟酰胺相关，烟酰胺酶是烟草中烟碱合成