牛瑟氏泰勒虫吉林株ITS基因的克隆与系统进化分析.pdfVIP

畜牧与兽医 2011年 第43卷 第6期 牛瑟 氏泰勒虫吉林株 ITS基 因的克隆与系统进化分析 钱年超 ，张 影，薛书江，贾立军，张守发 (延边大学农学院动物医学系，吉林 延吉 133002) 摘要 ：本研究根据GenBank上的牛瑟氏泰勒虫内转录间隔区基因 (ITS基因)设计合成1对特异性引物，以采自吉林省珲春市某养牛场的血液样 本为试验材料，PCR扩增牛瑟氏泰勒虫 ITS基因，克隆至pMD一18TSimple载体，进行序列测定 ，将该基因序列与GenBank上 9种已知的泰勒虫相 应序列进行比较分析，建立系统进化树。结果表明：牛瑟氏泰勒虫吉林株与美国株亲缘关系较近，其次是水牛泰勒虫，与其他泰勒虫亲缘关系 较远 。 关键词 ：牛瑟氏泰勒虫；ITS基因；克隆；系统发育树 中图分类号：$852．7 文献标识码 ：A 文章编号：0529—5130(2011)06—0005—03 CloningandphylogeneticanalysisofITSgenefrom TheileriasergentiJilinstrain QIANNian—chao，ZHANGYing，XUEShu-jiang，JIALi-jun，ZHANGShou—fa (DepartmentofVeterinaryMedicine，AgricultureCollegeofYanbianUniversity，Yanji133002，China) Abstract：ApairofspecificprimerswassynthesizedaccordingtoTheileriasergentiinternaltranscribedspacers(ITS)geneinGenBank． Bloodsampleswerecollectedfrom acattlefarm inHunchun．Jilinprovince． sergentiITSgenewasamplifiedbyPCRandclonedintopMD一 18T Simplevectorforsequencing．Theresultofsequenceanalysiswascomparedwith thoseof9 otherTheileria strainsavailableinGenBank andthephylogenetictreewasconstructed．Theresultshowedthat sergentiJilinstrainisclosertoAmericanstrain．ofllowedbyTheileria buffeli，butfarrfom otherTheileriastrains． Keywords：Theileriasergenti；ITSgene；clone；phylogenetictree 牛瑟氏泰勒虫 (Theileriasergenti)是一种经蜱传 步发展成一个新的分子标记 J，常用于种和亚种的 播，对牛危害严重，流行较广的血液寄生虫，呈世界 系统进化分析。本试验基于 ITS1—5．8S-ITS2序列分 性分布 ¨。最早由~[KHMOB和~erTepeB在俄罗斯远东 析，进一步研究和验证牛瑟 氏泰勒虫与其他国家和地 地区牛体上发现，并鉴定为 1个新种 。此后在 日 区不同种泰勒虫的系统发育关系，为牛瑟 氏泰勒虫的 本、韩国、泰 国、荷兰、意大利等国相继出现，我国 分类鉴定和分子生物学诊断提供更为可靠的理论 由杨平于 1964年在贵州首次发现。随着我 国养牛业 依据。 的发展，该病在我国的发生与流行频率、流行区域逐 1 材料与方法 渐扩大，已严重威胁到我国养牛业的健康发展。转录 间隔区 (ITS)是核糖体基因中位于核糖体大小亚基 1．1 血液样本 之间，是核糖体 DNA (rDNA)上 18s和28s基因之 试验所用牛血液样本采 自吉林省珲春市，病牛表 间的区域片段，即 ITS1．5．8S．ITS2片段 。其 中，5．8S