番杏Na^＋／H^＋逆向转运蛋白基因的克隆及特性分析.pdfVIP

维普资讯 高技术通讯 2004．11 番杏Na+／H+逆向转运蛋白基因的克隆及特性分析① 吕慧颖② * 李银心③ 陈 华 刘 晶 李 平 (中国科学院植物研究所光合作用与环境分子生理学重点实验室 北京 100093) ( 中国科学院遗传与发育生物学研究所 北京 100101) (… 东北农业大学大豆研究所 哈尔滨 150030) 摘 要 根据同源序列设计筒并引物，通过RT—PCR及RACE的方法从盐生植物番杏中克 隆出Na ／H 逆 向运输蛋 白基因。序列分析表明，该cDNA全长2199bp，开放读码框为 1665bp，可编码一个554个氨基酸的多肽，与其他植物中已经克隆的Na ／H 逆向转运蛋 白具有很高的同源性。系统发育分析表明该蛋白(TtNHX1)与液泡型的Na ／H 逆向转运 蛋白的亲缘较近，与质膜型的Na ／H 逆 向转运蛋 白亲缘关系较远。TtNHX1的表达具有 组织特异性，在番杏的根、茎和叶中均有表达，而花中没有表达。经NaC1诱导后根、茎和 叶中的表达量增加，而花中仍没有表达。 关键词 番杏，Na ／H 逆向转运蛋 白，~NHX1cDNA，RACE 花和结实。尽管叶片中Na浓度高，但番茄果实中 0 引 言 Na浓度很低l。说明转 Na ／H 逆向运输蛋 白单 基因能够明显提高植物耐盐性，同时，具有器官表达 植物为了抵御盐胁迫，形成了一套适应机制_1j， 的特异性，有力支持了Na ／H 逆向运输蛋白在植 主要是通过在细胞质中积累小分子的无毒有机溶质 物耐盐性方面所具有的重要作用。 和离子在液泡 内区隔化来实现渗透平衡。对于植物 植物中Na ／H 逆向运输蛋白最早发现是在大 来说，Na是细胞生长所需要的基本营养成分，但 麦质膜上，此后在液泡膜上也有研究报道，到 目前已 Na的区隔化是它在盐环境中生存的必要保障。 经在大量的盐生植物及非盐生植物中发现Na ／H Na ／H 逆向运输蛋 白是一种 Na 的逆向转运体， 逆向运输蛋白活性。已经从拟南芥 (AtNHX1)L8]、水 在细胞质膜和液泡膜上均有分布，液泡膜上的Na ／ 稻(OsNHX1)l、北滨藜 (AgNHX1)lmj、冰叶午时花 H 逆向运输蛋白将细胞质中的Na逆着 Na浓度 (McNHX1)分离出Na ／H 逆向运输蛋白基因，证明 梯度运送到液泡中区隔化集中，细胞质膜上的Na ／ 该基因的表达产物具有Na ／H 交换的功能。虽然 H 逆向运输蛋 白将细胞质中的Na逆 向运送到胞 外高Na环境中，从而减少了钠离子对细胞质中细 这些基因绝大多数是从具有低逆向运输活性的甜土 胞器的毒害，对于维持细胞的渗透平衡起重要作 植物中分离的，但前人的研究表明盐生植物普遍具 用 2『．3。 有在液泡中高效区隔化Na的机制_8。关于盐生植 物Na ／H 逆向运输蛋白基因只对北滨藜_8J和碱蓬 耐盐性属复杂性状，大量的盐胁迫反应相关基 因的存