重组腺相关病毒神经肽Y基因转染对红藻氨酸致痫大鼠海马组织中P35表达的影响.pdfVIP

重组腺相关病毒神经肽Y基因转染对红藻氨 酸致痫大鼠海马组织中P35表达的影响 娄燕1 李文玲2 张新颖3 董长征2 赵文清2 [摘要] 目的 观察重组腺相关病毒介导人源性神经肽Y基因(rAAV2/1-hNPY-EGFP)转染对红藻 氢酸(kainicacid,KA)致痫大鼠海马组织中P35表达的影响，以探讨其在癫痫发病机制中的作用以及NPY基 因治疗慢性癫痫的可能机制。方法 72只Wistar健康雄性成年大鼠，随机分为点燃组(n=48)和对照组(n= 24)。点燃组海马CA3区间断注射KA1.5μl（0.4μg/μl）5次制成慢性癫痫大鼠模型后，又随机分为神经肽Y (neuropeptide，NPY)组(n=24)和KA组(n=24)。NPY组脑室注射rAAV2/I-hNPY-EGFP1Oμl，KA组脑室 注射等量的生理盐水。对照组海马CA3区注射等量的生理盐水 （本研究的前期实验已证明rAAV2/I-empty -EGFP对实验结果无明显影响）[3]。将3组大鼠分别于注射后2周和4周断头取大脑海马组织，Westernblot 法检测大鼠海马组织中NPY和P35的mRNA表达，免疫组织化学技术检测NPY和P35的蛋白表达。结果 在注射后2周，NPY组和KA组大鼠NPY和P35的mRNA及蛋白表达水平均升高，与对照组相比差异均有显 著性(P＜0.05)；在注射后4周，NPY组海马组织中NPY的表达高于KA组(P＜0.05)，而P35的表达则明 显低于KA组，有显著性差异 （P＜0.05）。结论 rAAV2/1-hNPY-EGFP基因转染可以抑制KA诱导的癫 痫大鼠海马组织中P35的表达，NPY有可能通过下调海马组织中P35的表达水平来发挥抗癫痫作用。 [关键词]重组腺相关病毒；神经肽Y；癫痫；红藻氨酸；p35 TheeffectsofneuropeptideYgenetransfectionusingrecombinantadeno-associatedvirusvectoronthe expressionofp35inhippocampusoftheratmodelinducedbykainicacid LOUYan1LIWen-ling2ZHANG Xin-ying3 DONGChang-zheng2ZHAOWen-qing2 1DepartmentofPediatrics,HebeiGeneralHospital,Hebei 050051,China;2DepartmentofNeurosurgery,HebeiGeneralHospital,Hebei050051,China;3HebeiMedicalUniver sity,Hebei050017,China [Abstract] Objectiv ToobservetheeffectsofgenetransfectionofrAAV2/1-hNPY-EGFPontheex pressionofp35inhippocampusoftheratmodelinducedbykainicacid,andtoexploreitsroleinthepathogenesisof epilepsy,aswellasthepossiblemechanismoftheNPYgenetherapyofchronicepilepsy.Methods Altogether72 healthymaleWistaradultratswererandomlydividedintoacontrolgroupandakainicacid(KA)treatedgroup.The epilepticmodelswereestablishedbytheinjectionofKA1.5μ1(0.4p.g/μl)fivetimestohippocampusCA3areawhile thecontrolratswereinjectedwithanequaldoseofsaline.ThenKAtreatedgroupwererandomlydividedintoneu ropeptide(NPY)group(n=24)andKAgroup(n=24).NPYgroup,inwhich101ofrAAV2/1-hNPY-EGFP wereinjectedtoventricleinsuccessfulratschronicmodel.At2wand4waftervectorinjectionrespectively,ratsin3 groupswerekilled,hippocampalNPYandp35mRNAweredet