反胶团萃取鱼精蛋白的初步研究.pdfVIP

第33卷第4期 左 工 VAo1．33No．4 2010年 4月 pt． 2010 反胶团萃取鱼精蛋白的初步研究 畅天狮 1,2刘 琳 ，安家彦 ，刘俊果 2， (1．大连工业大学生物与食品工程学院，辽宁 大连 l16034；2．河北科技大学生物科学与工程学院，河北 石家庄 050018~3．河北省发酵工程技术研究中心，河北 石家庄 050018) [摘 要]鱼精蛋白是一种重要的药用蛋白质，初步研究了反胶团法提取纯化鱼精蛋白的过程。结果表明，采用 2一乙基己基 琥珀酸酯磺酸钠 (AOT)／异辛烷体系萃取鲑鱼鱼精蛋白，萃取率接近 100％，异丙醇显著强化反萃过程。采用反胶团法萃取纯化鱼 精蛋白从技术角度来说是可行的。 [关键词]鱼精蛋 白；反胶团萃取；纯化 [中图分类号]TS201．2+1 [文献标识码]A [文章编号]1008—5095(2010)04—0042一o3 鱼精蛋白是一种富含精氨酸的碱性蛋白，分子量 术有限公司；鲤鱼鱼自，市场上收购。十二烷基硫酸 大约为4070道尔顿[1]。临床上可以作为胰岛素的载 钠 (／-L学纯)，天津市光复精细化工研究所；2一乙基己 体，延长胰岛素的半衰期，还用于肝素注射过量引起 基琥珀酸酯磺酸钠(分析纯)，Sigma公司。 的出血；另外鱼精蛋白作为一种天然食品防腐剂，不 紫外可见分光光度计：752型，上海光谱仪器有 但抑菌范围广、热稳定性好，而且卫生安全。生产鱼精 限公司；摇瓶柜：HYG-IIB型，上海欣蕊 自动化设备有 蛋白的原料为鱼类内脏中的精巢组织，俗称鱼 白，目 限公司；洁净工作台：Sw—CJ-2FD型，苏净集团安泰 前多作为加工鱼粉的原料，其经济价值较低嘲。 公司；高速台式离心机 ：H1650型，长沙缃仪离心机 鱼精蛋 白基本上是以硫酸或盐酸为主要提取剂， 仪器有限公司；其他常规实验室仪器。 以有机溶剂沉淀法进行提取。提取得到的鱼精蛋白粗 1．2 实验方法 品，一般采用葡聚糖凝胶柱层析法纯化，也可采用聚 本实验选用反胶 团法萃取、反萃取鱼精蛋白。 丙烯酰胺等电聚焦进行纯化嘲。反胶团萃取是近年发 1．2．1 考马斯亮蓝法测定鱼精蛋白浓度 展起来的分离和纯化生物物质的新方法。反胶团法萃 配制考马斯亮蓝试剂 以及约0．25mg／mL鱼精蛋 取蛋白质的优点主要在于有很高的萃取率和反萃取 白溶液 ，按下述方法绘制标准 曲线：分别取鱼精蛋白 率并具有选择性；分离、浓缩可 同时进行，过程简单； 溶液 (0．25mg／mL)0、40、80、120、160、200 L于试 能解决蛋白质在非细胞环境中迅速失活的问题；溶剂 管中，然后加去离子水至200uL。分别加入 5mL考 可反复使用、成本低廉_3]。目前国内外文献中未见到 马斯亮蓝溶液，混匀，静置 lOmin，在 595nm处 比 任何有关反胶团法萃取鱼精蛋白的报道。 色，以吸光值为横坐标 ，鱼精蛋 白溶液浓度为纵 本文首先以纯品鲑鱼鱼精蛋白初步摸索了反胶 坐标，绘制标准 曲线 。线性 回归得标准 曲线方程 团法提取纯化鱼精蛋白技术的可行性，然后研究了从 为 y=O．67088X，回归系数 为0．998。 鲤鱼鱼白粗提液中采用反胶 团法提取纯化鲤鱼鱼精 1．2．2 硫酸鲑鱼鱼精蛋白反胶团萃取行为的初步研 蛋 白的过程，为以后的工艺改进提供理论支持，达到 究 降低成本、提高经济效益的目的。