脑缺血／再灌注后神经元Ku蛋白的表达与DNA双链损伤的变化.pdfVIP

感染 、炎症、修复 2009年 3月第 1O卷 第 1期 · 论 著 · 脑缺血 ／再灌注后神经元 Ku蛋 白的表达与 DNA双链损伤的变化 高长越 周华东 方传勤 何洪波 (第三军医大学大坪医院神经 内科 ，重庆 400042) 【摘要】 目的：探讨脑缺血 ／再灌注后早期神经元 Ku蛋 白的表达与 DNA双链损伤 的变化及其与神经元转 归的关系。方法 ：56只大鼠随机分为脑缺血／再灌注组(大脑 中动脉线栓法制备缺血 ／再灌注模型)和假手术组， 分别于术后 1、6、12、24、48、72h6个时相点取脑组织，免疫组化法测定缺血 ／再灌注 区Ku异二聚体的成分之一 Ku70的表达 ，原位末端标记法 (TUNEL法)观察脑缺血 ／再灌注后不 同时相点缺血 ／再灌注 区神经元 DNA双链 损伤 的变化 ，DNA琼脂糖凝胶 电泳检测缺血 ／再灌注 区细胞凋亡 。结果：脑缺血 ／再灌注 1h时，缺血侧 Ku70阳 性细胞数即开始减少，缺血 ／再灌注 24h降至最低水平；缺血 ／再灌注 6h，缺血区TUNEL细胞数量开始升高，于 24hTUNEL阳性细胞数均达到高峰，其后逐渐减少 ；24h后细胞 DNA琼脂糖凝胶 电泳始见凋亡特有的阶梯状 (Ladder)条带 。结论 ：脑缺血 ／再灌注早期，神经元 Ku蛋 白表达下降，可能是导致双链断裂 的DNA无法得到修 复造成神经元 DNA不可逆性损伤 ，进而引起神经元死亡的原因。 关键词 缺血 ／再灌注 ，脑 神经元 DNA双链断裂 Ku70 TherelationshipbetweenKuexpressionandneuronalDNAdoublestrandbreaksaftercerebralisehemia／reperfnsion GaoChangyue，ZhouHuadong，FangChuanqin，eta1．DepartmentofNeurology，DapingHospital，Third M ilitaryM edicalUniversity，Chongqing400042，China Correspondingauthor：ZhouHuadong(Email：zhouhuad@163．com) Abstract0bjective：ToinvestigatetherelationshipbetweenKuexpressionandthechangeinneuronalDNA doublestrandbreaksearlyaftercerebralischemia／reperfusion．Methods：Fifty-sixratswererandomlydividedinto twogroups：cerebralischemia／reperfusiongroup，inwhichthecerebralischemia／reperfusionmodelwasreplicated bythemethodofcerebralmiddlearteryocclusion，andcontrolgroup(sham operated)．Cerebraltissueswerehar- vestedat1，6，12，24，48and72hoursrespectively．DNA doublestrandbreaks，Ku70andcellapoptosiswere examinedbyTUNEL method，immunohistochemistry，and gele1ectrophoresismethod．Results：Ku70positive cellsincortexandbasalgangliadecreased at1hourafterreperfusion，reducedtOthelowestleve1at24 hours． NeuronalDNA doublestrandbreaksoccurredintheearlystageaftercerebralischemia／reperfusion．DNA ladders begantoappearat24hoursafterreperfusion．Conclusion：Neuro