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四国药典中抑菌剂效力检查法的比较肖璜，林吉恒2，陈万胜3，马仕洪1，胡昌勤1（1.中国食品药品检定研究院，北京100050；2. 舟山市食品药品检验所，舟山316021；3.许昌市食品药品检验所，许昌 461000）中图分类号：R921.2 文献标识码：AComparison of BacteriostatEffect Test Method in FourCountry’spharmacopoeiaXiao Huang1，Lin Jiheng2, Chen Wansheng3,MaShihong1, Hu Changqin1*（1.National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 10050; 2. Zhoushan Institute for Food and Drug Control, Zhoushan 316021;3.Xuchang Institute for Food and Drug Control，Xuchang 461000）眼用制剂是常见的非处方药,目前市售的眼用制剂基本为多剂量包装。由于在使用和保存过程中可能被泪液或空气中的微生物污染，因此，大部分眼用制剂（包括抗生素类产品）中都添加有抑菌剂，以防止或抑制微生物的生长与繁殖。对抑菌剂的合理选择、使用和监管一直是我国药监及药检人员关注的问题[1-3]。虽然《中国药典》（ChP）、《美国药典》（USP）、《欧洲药典》（EP）和《日本药局方》(JP)中均收载有抑菌剂效力检查法，但其中的测定方法和标准并不统一。ChP2010年版收载的抑菌剂效力检查法与USP基本一致，但实验操作过程并不完全相同。为深刻理解四国药典中的抑菌剂效力检查法在眼用制剂应用中的差异，本文以氯霉素滴眼液为例，对其进行系统的比较。1 仪器与材料1.1仪器AP5000型全自动微生物接种仪（广州千江企业有限公司），G6型自动菌落分析仪（杭州迅数科技有限公司）。1. 2试药尼泊金乙酯钠（SIGMA），氯霉素（东北制药总厂），醋酸苯汞（贵州省铜仁化学试剂厂），硫柳汞、硼酸、硼砂（国药集团化学试剂有限公司）。1.3菌株金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus)〔CMCC ( B) 26003〕，铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC ( B) 10104〕，白色念珠菌 ( Candida albicans)〔CMCC ( F) 98 001〕均来自中国食品药品检定研究院医学菌种保藏中心，实验菌均为第3 代。1.4培养基胰胨大豆琼脂（TSA）培养基（上海诺狄生物科技有限公司），沙氏葡萄糖肉汤（SDB）培养基（北京三药科技开发公司）。2 方法与结果2.1菌液制备金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌采用 TSA 培养基，30 ～ 35 ℃培养18 ～ 24 h；白色念珠菌采用沙氏葡萄糖肉汤（SDB）培养基，20 ～ 25 ℃培养 24 ～ 48 h，( 3000 r ·min-1离心 10 min，收集菌体。所有菌株均采用比浊法用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每1 ml含菌量约为107～10 8cfu 的菌悬液。2.2抑菌效力试验以硼酸15.8mg·ml-1，硼砂0.65mg·ml-1为基础液制备仅含抑菌剂和氯霉素+抑菌剂的水溶液: a 组，含0.25mg·ml-1尼泊金乙酯；b组，含0.02mg·ml-1硫柳汞；c 组，含0.02mg·ml-1醋酸苯汞；d组，含0.25mg·ml-1尼泊金乙酯+2.5mg·ml-1氯霉素；e组，含0.02mg·ml-1硫柳汞+2.5mg·ml-1氯霉素；f组，含0.02mg·ml-1醋酸苯汞+2.5mg·ml-1氯霉素。分别取上述6组供试品溶液至离心管中，每管10 ml，分别接种3株菌约105～ 106cfu· ml-1，混匀，密封置20 ～25 ℃避光保存，分别参照ChP及EP标准，在0h（样品接触时），6h，24h对供试品中的微生物进行计数，依据相应判断标准进行结果分析。2.3试验结果试验结果见图1～2。ChP标准中，对0h的定义于其他三国药典不同，强调为“刚接触样品时”。由图1可见，虽然供试品中3株菌株的接种量相同，但0h的菌落计数差异较大，尤其是在醋酸苯汞组中，白色念珠菌的菌落计数结果提示其在接触抑菌剂的瞬间即被杀灭。上述结果还提示，不同的抑菌剂对微生物的瞬间杀灭能力不同，醋酸苯汞对微生物的瞬间杀灭能力明显强于其他抑菌剂。图1 0h细菌组及真菌组的菌落计数对数减小值2.4 四国药典抑菌效力试验比较四国药典收载的抑菌效力实验方法，EP标准要求考察6h，24h，7d，14d，28d共计五个时间点，USP以及ChP要求考察7d，14d，28d三个时间点，JP仅要求考察1