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中南医学科学杂志2013年11月第41卷第6期 551
文章编号:2095-1116(2013)06-0551-04 ·基础医学·
鼻咽癌相关新基因NPCEDRG突变型重组表达
载体的构建及生物信息学分析
1 2 1 1 1 1 3
阳摇 帅 ,胡摇 华 ,赵摇 强 ,龚邵新 ,贺荣芳 ,张小丽 ,贺修胜
(1.南华大学附属第一医院病理科,湖南衡阳421001;2.南华大学附属第二医院病理科;
3.南华大学肿瘤研究所)
TM
摘摇 要:摇 目的摇 构建带His标签的突变型及野生型pcDNA 3.1/ myc鄄HisB/ NPCEDRG重组表达载体。 摇 方
法摇 以pcDNA3.1鄄NPCEDRG重组质粒为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增NPCEDRG基因编码区,利用
PCR过程中的碱基错配,随机突变产生NPCEDRG的突变体,分别将野生型及突变型NPCEDRG基因编码区cDNA
TM
插入pcDNA 3.1/ myc鄄HisB真核表达载体,双酶切鉴定,测序验证,生物信息学方法进行蛋白质结构预测。 摇 结果
TM
双酶切突变型及野生型pcDNA 3.1/ myc鄄HisB/ NPCEDRG重组表达载体,均产生519 bp 长度的目的片断。 测序结
260 260 287 287
果证实,突变型NPCEDRG基因有两个点发生了突变,分别是T 鄄C 和T 鄄C ,但没有移码突变,在线生物信息
73 73 82 82
学分析结果示其相应氨基酸序列改变为V 鄄A 和M 鄄T ;野生型NPCEDRG基因序列与Genebank 已知序列一致。
两个重组载体插入片段大小均为513 bp,插入方向及位置正确,能表达预期所要的融合蛋白。 摇 结论摇 成功构建
TM
了带His标签的突变型及野生型pcDNA 3.1/ myc鄄HisB/ NPCEDRG重组表达载体,为深入研究NPCEDRG基因功
能和揭示鼻咽癌发病分子机制提供实验手段。
关键词:摇 NPCEDRG;摇 聚合酶链式反应;摇 随机突变
中图分类号:R739郾6摇 摇 摇 文献标识码:A
Construction of Eukaryotic Expression Recombinant of Mutational
NPCEDRG and Its Bioinformatics Analysis
YANG Shuai,HU Hua,ZHAO Qiang,et al
(Department of Pathology,the FirstAffiliated Hospital,University of South China,
Hengyang,Hunan421001,China)
Abstract:摇 Objective摇 To c
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