高产蛋白酶菌株Bacillus cereus KM-4的产酶实时动态研究.pdfVIP

生物技 术通报 · 研 究报 告 · BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2011年第 6期 高产蛋 白酶菌株 BacilluscereusKM-4的 产酶实时动态研究 宋园亮 黄文宇 张忠华 昊少雄 殷建忠 柳陈坚 (昆明理工大学生命科学与技术学院应用微生物研究室，昆明650224；昆明医学院，昆明650500) 摘 要 ： 从昆明豆豉样品分离得到一株蛋 白酶活性较高的菌株 ，其酶活达 l4．58U／mL。采用 SDSg·elatin蛋 白电 泳及Zymography染色，结合茚三酮法测定其蛋白酶活性，对 KM·4菌株分泌的蛋白酶进行酶谱分析。结果表明，培养pH6．0 有利于该菌株分泌分子量约为 116kD的蛋白酶，经明胶诱导培养后，其酶活明显提高，推测其所分泌的蛋白酶可能需要蛋白 质诱导。 关键词： 豆豉 蜡状芽孢杆菌 蛋 白酶 酶谱分析 SecreteDynam icM onitoringResearchonBacilluscereusKM -4 StrainwithHigh-yieldProteaseProducing SongYuanliang。 HuangWenyu ZhangZhonghua。 WuShaoxiong YinJianzhong2 LiuChenjian (’LaboratoryofAppleidMicrobiology，FacultyofLifeScienceandTechnology，KunmingUniversityofSceinceand Technology， Kunming650224；KunmingMedcialUniversity，Kunming650500) Abstract： Therewasabacteriastrainswithhigh proteaseactivityisolatedfrom kunming Douchisamples ，whoseactivityWas 14．58U／mL ．BySDS—Gelatin—PAGEelectrophoresiscombiningwitllzymographystainingtoanalyzethepatternofsecretedenzymes． Meanwhiletheproteaseactivityweredetermined byNinhydrinmethod．ItindicatedthattheculturepH6．0wasbenefitfortheKM一4 straintosecretethemajorproteasewithmolecularweightof116kD．Undergelatininducing，itsactivitywassignificantlyincreased．It Was suggestedthatthesecretedenzymemightbeinducedbyprotein． Keywords： Douchi Bacilluscereus Protease Zymographypattern 蛋 白酶是催化分解肽键水解成氨基酸或短肽 的 本研究从昆明采集的豆豉样品中分离得到一株 一 类酶，它也是一种重要的工业用酶，其生产量几乎 蛋白酶活性较高的菌株，其酶活达到 14．58U／mL， 占生物酶制剂市场 的65％以上 。它被广泛应用于 而且该菌株分泌单一的蛋 白酶 。通过考察培养时 食品、药物、皮革制备、蛋 白水解和纺织等工业。蛋 间、培养 pH及蛋 白底物诱导对该菌株的蛋 白酶分 白酶种类繁多，来源广，一般依据其来源可将其分为 泌的影响，同时对其蛋 白酶产生进行实时动态研 动物蛋 白酶、植物蛋白酶和微生物蛋 白酶3种类型。 究 。采用 SDS—gelatin—PAGE分析及蛋 白酶活性 由于微生物具有资源广泛，生长繁殖快，培养方法简 测定，判定 KM一4菌株